產(chǎn)單核細胞李氏桿菌噬菌體分離、超離、宿主譜鑒定及生長曲線繪制（三）
3討論
目前，國內(nèi)從事產(chǎn)單核細胞李氏桿菌噬菌體的研究，多見于產(chǎn)單核細胞李氏桿菌噬菌體裂解酶、噬菌體蛋白對于李氏桿菌的快速檢測、產(chǎn)單核細胞李氏桿菌溶源性噬菌體的誘導(dǎo)與鑒定等。對于產(chǎn)單核細胞李氏桿菌裂解性噬菌體的分離鑒定及臨床應(yīng)用相關(guān)研究較少，而國外此方面研究相對較多，美國、加拿大和瑞士已使用LISTEXP100用以防治產(chǎn)單核細胞李氏桿菌所引起的食品安全問題；LP8與國外LISTEXP100產(chǎn)品相比，具有作用時間短、作用溫度范圍廣、保存時效性長等特點。LP8在25～45℃具有很高的活性，而且在55℃時，LP8噬菌體的效價仍能保持在2.1×10PFU·mL。
Song等測定3種LM噬菌體LP020、LP027、LP094的一步生長曲線結(jié)果顯示，這3種LM噬菌體的潛伏期都在45～60 min，LP8的潛伏期在23 min左右，80 min便達到平臺期，平臺期最高效價4種噬菌體都在1×10PFU·mL以上，具有相同效果，但LP8作用速度更快。Lee等從雞糞樣品中分離到的兩種LM噬菌體LMP1和LMP7對ATCC7644、ATCC15313、ATCC19114、ATCC19115四種LM具有裂解性。LP8除了對18株產(chǎn)單核細胞李氏桿菌具有裂解性外，對5株威爾斯李氏桿菌(9-2、4-40、C10、C59、4-43)也具有裂解性，說明LP8具有跨種裂解性，且有較高的感染復(fù)數(shù)。綜上，LP8具有更好的生物制劑開發(fā)前景。
本試驗分離得到的噬菌體中，有30%的噬菌體會在純化階段不能穩(wěn)定傳代而丟失，表明丟失的噬菌體本身裂解能力并不強。司樨東提出，噬菌體在感染宿主菌的過程中，部分基因會整合到宿主菌的基因組中，在一定條件下并不會立即表達，裂解性噬菌體基因有成為溶原性噬菌體基因的可能性，也會影響噬菌體的表達。在本試驗過程中，發(fā)現(xiàn)瓊脂的濃度較低時，噬菌斑會變大，顏色更透亮。究其原因，下層瓊脂一般為營養(yǎng)瓊脂，較硬的質(zhì)地為上層瓊脂提供支持和營養(yǎng)作用，上層瓊脂質(zhì)地較軟，噬菌體受到本身構(gòu)造限制，其穿行能力較弱，如果僅限于培養(yǎng)細菌涂布后干燥的平板表面條件，噬菌體對周圍的細菌沒有侵襲能力，很小的作用范圍并不支持形成肉眼可見的噬菌斑，而且噬菌斑能被肉眼觀察，是由于在噬菌斑內(nèi)沒有細菌生長，與周圍生長有細菌的瓊脂形成色差導(dǎo)致。我們在普通光學(xué)顯微鏡下觀察噬菌斑，發(fā)現(xiàn)噬菌斑相較于周圍瓊脂較低，形成一個略淺的凹陷，裂解挑斑發(fā)現(xiàn)噬菌斑本身具有一定厚度，與周圍正常瓊脂相比，厚度約減少1/5，可能是由于噬菌斑內(nèi)生長的細菌被侵蝕死亡而造成的坍縮導(dǎo)致。
通過對LP8全基因組序列進行對比，確定本試驗所分離的噬菌體為李氏桿菌新噬菌體，噬菌體基因組編碼區(qū)占基因組大小的80%以上。所編碼的基因中，76個基因與沙門菌噬菌體、大腸桿菌噬菌體、歐文菌噬菌體、檸檬酸桿菌噬菌體中的部分基因具有高度相似性，基因組序列單一覆蓋率最大7%，累計覆蓋率38.4%。基因組所編碼的120個基因與噬菌體基因數(shù)據(jù)庫中的基因相似性都很低，其中44個基因功能未知，以上現(xiàn)象說明LP8在進化過程中可能經(jīng)歷了復(fù)雜的基因水平轉(zhuǎn)移、突變、重組等過程，也有可能是由其他噬菌體演化而來。
4結(jié)論
LP8相較于其他噬菌體，熱穩(wěn)定性更強，酸堿耐受范圍更廣，對有機溶劑的抵抗性更高，對LM具有強裂解性，并且可以跨種裂解李氏桿菌。因此，LP8噬菌體在未來的噬菌體生物制劑的研發(fā)過程中，具有一定的開發(fā)潛力。
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