金黃色葡萄球菌：紅霉素、慶大霉素和氧氟沙星時間-抑菌生長曲線分析（一）
抗生素是目前治療細菌感染的主要藥物，其出現和使用為人類健康做出了不可磨滅的貢獻，對動物疾病的預防與控制作用同樣功不可沒。但不規范用藥則會引發畜禽的群體性危害，造成獸藥殘留超標、產生細菌耐藥性和畜禽產品質量安全等問題。為了滿足人類對動物性食品不斷增長的需求，人們在畜禽養殖過程中常常大量使用抗生素類藥物來預防動物性疾病并促進生長。抗生素的殘留使得一些動物體內的細菌常暴露在抗生素環境中，體內的耐藥菌株將會得到選擇性增殖，使得抗生素的治療效果下降。
金黃色葡萄球菌屬于葡萄球菌屬（Staphylococcus），是革蘭氏陽性菌的代表，可引起許多嚴重感染，是臨床上重要的致病菌，特別是超級細菌-耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的出現及其耐藥性的快速增長，使其成為全球內感染的首要病原菌。金黃色葡萄球菌常引起兩類疾病：（1）化膿性疾病，主要引起動物的乳房炎、關節炎等，可通過動物傳遞給人類；（2）毒素性疾病，會引起人和動物的中毒性嘔吐等，嚴重威脅人類的食品安全和公共衛生。
微生物比濁法能直觀地反應抗生素總的抗菌能力，因此利用該原理，本文選擇了慶大霉素、紅霉素、氧氟沙星3種不同類型的藥物，實時測定并繪制時間-吸光度抑菌生長曲線，以此分析3種藥物在不同濃度下、不同時間節點上與細菌相互作用的關系，旨在為藥效學的研究、解決細菌耐藥性及指導臨床合理使用抗生素提供數據和試驗參考。
1材料與方法
1.1菌株來源
質控菌株為金黃色葡萄球菌ATCC29213，購自北京蘭伯瑞生物技術有限責任公司；實驗菌株DX1、XNC22于養殖場中分離獲得。
1.2儀器
CLASSⅡ生物安全柜，購自美國NUAIRE公司；全自動高壓滅菌器，購自日本三洋電器集團；恒溫培養箱，購自德國BINDER公司；VITEK 2 Compact全自動細菌鑒定及藥敏分析系統，購自BIOMERIEUX公司；WBS-100微生物比濁法測定儀，購自北京先驅威鋒技術開發公司。
1.3培養基與材料
抗生素檢定培養基3號，購自北京中海生物科技有限公司；營養瓊脂，購自北京陸橋技術有限責任公司；革蘭氏陽性菌鑒定卡（GP鑒定卡），購自BIOMERIEUX公司；標準品購自中國獸醫藥品監察所或中國食品藥品檢定研究院。
1.4方法
1.4.1菌懸液的制備
根據美國臨床和實驗室標準化研究所（CLSI，Clinical and Laboratory Standards Institute）對菌懸液濃度的要求，來稀釋菌懸液。將保存的菌種接種于配制好的營養瓊脂培養基中，置于37℃培養箱中培養24h后取出待用，在生物安全柜中，用棉簽取單菌落于裝有0.85%滅菌生理鹽水的安瓿瓶中，用麥氏比濁儀將試驗菌液濃度調節為0.5麥氏（0.5麥氏菌懸液的濃度約為1.5×108cfu/mL），后進一步稀釋至5×105cfu/mL，備用。
1.4.2儲備藥液的制備
將慶大霉素、紅霉素、氧氟沙星標準品分別溶解并稀釋成2048μg/mL的抗生素貯存液。配制的藥液以質控菌株金黃色葡萄球菌ATCC®29213進行質控，其最低抑菌濃度（Minimum inhibitory concentration，MIC）值在CLSI允許的范圍內。
1.4.3微量稀釋法-藥物敏感性試驗
采用CLSI指定的微量稀釋法，進行藥物敏感性實驗。取稀釋至5×105cfu/mL濃度的菌液0.1mL分別加入含系列抗菌藥物溶液的板中，混勻使試管中最終抗菌藥物的濃度為原稀釋濃度的50%，并設置陽性對照和陰性對照。將加有菌液和抗菌藥物的板置37℃培養箱中培養18～20 h。觀察記錄結果，以無菌生長的最低抗菌藥物溶液的濃度為MIC值。判定標準參照CLSI標準，具體見表1，按判斷標準判斷被檢菌株的敏感性為敏感（S），中度敏感（I）或耐藥（R）。
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