雪茄煙中霉菌培養(yǎng)基種類篩選、計數(shù)方法適用性研究（一）
摘要：為明確霉菌計數(shù)方法對雪茄煙的適用性，采用孟加拉紅瓊脂培養(yǎng)基、改良馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基和SYMPHONY Agar快速顯色培養(yǎng)基對13種雪茄煙進行霉菌計數(shù)，評價3種培養(yǎng)基在不同接種方式條件下雪茄煙中霉菌計數(shù)結(jié)果的一致性，并對各霉菌計數(shù)方法進行比較。結(jié)果表明：①同種接種方式條件下，3種培養(yǎng)基的霉菌計數(shù)結(jié)果的一致性較好；②相同培養(yǎng)基條件下，平板涂布法操作更簡便，菌落分布均勻，典型菌落更易判讀；③3種霉菌計數(shù)培養(yǎng)基相比，SYMPHONY Agar快速顯色培養(yǎng)基培養(yǎng)周期短，霉菌典型菌落大小均勻，更容易計數(shù)。因此，SYMPHONY Agar快速顯色培養(yǎng)基和平板涂布法接種方式更適合于雪茄煙中的霉菌計數(shù)。
霉變是煙草及煙草制品存儲中需要重點研究解決的關(guān)鍵問題之一，霉變除影響煙草及煙草制品感官品質(zhì)外還可能造成嚴重的經(jīng)濟損失[1,4-6]。雪茄煙與傳統(tǒng)卷煙相比，更易發(fā)生霉變，而預防和控制雪茄煙霉變的前提是能夠快速準確地檢測雪茄煙中的霉菌含量，評估雪茄煙霉變發(fā)生的風險。由于雪茄煙生產(chǎn)及存儲的特殊性和霉菌的差異性，尋找更加適合于雪茄煙中霉菌計數(shù)的方法尤為重要。
國內(nèi)外食品行業(yè)出臺了霉菌計數(shù)相關(guān)標準檢測方法，如ISO 21527—2:2008,GB 4789.15—2016和美國FDA官方檢測方法等，這些微生物學霉菌計數(shù)方法主要采用孟加拉紅瓊脂培養(yǎng)基或馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，推薦使用平板傾注法或平板涂布法兩種接種方式。煙草行業(yè)也參考食品相關(guān)檢測方法建立了煙草及煙草制品中霉菌計數(shù)方法標準，采用改良馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基進行平板傾注法接種。林華清等針對煙草及煙草制品中8種常見霉菌，對霉菌計數(shù)用培養(yǎng)基種類進行了篩選，但未對實際煙草樣品進行適用性驗證和分析。
由于不同類型煙草及煙草制品中霉菌種類較多且存在差異性，同時培養(yǎng)基種類和接種方式也直接影響計數(shù)結(jié)果的準確性，若在同等條件下將樣品中的霉菌盡可能多地培養(yǎng)出來，有必要對適宜的培養(yǎng)基種類進行系統(tǒng)比較和篩選，并優(yōu)化接種方式，以得到穩(wěn)定準確的檢測結(jié)果。為此，對目前的霉菌計數(shù)方法綜合分析后，選用孟加拉紅瓊脂培養(yǎng)基（GB法推薦用培養(yǎng)基）,改良馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（YC/T法推薦用培養(yǎng)基）和SYMPHONY Agar快速顯色培養(yǎng)基（Biokar法推薦用培養(yǎng)基）等3種培養(yǎng)基，采用平板涂布法與平板傾注法兩種接種方式對國內(nèi)市售13種雪茄煙進行霉菌計數(shù)，研究3種培養(yǎng)基在不同接種方式條件下雪茄煙中霉菌計數(shù)結(jié)果的差異性及霉菌形態(tài)的變化，并對各霉菌計數(shù)方法進行適用性評價，旨在為篩選出適宜雪茄煙的霉菌計數(shù)方法提供參考。
1材料與方法
1.1樣品信息
從視覺,嗅覺的角度，根據(jù)雪茄煙的霉變程度，選擇國內(nèi)市售13種具有代表性的雪茄煙（見表1）作為試驗樣品。13個樣品按茄芯原料形態(tài)分類，分為煙束（8種）,煙片（4種）和煙絲（1種）三類；按制作方式分為手制（10種）,半手制（1種）和機制（2種）三類；按包裝形式分為木盒（4種）,紙盒（7種）和鐵盒（2種）三類。
表1 13種雪茄煙樣品基本信息Tab.1 Basic information of 13 cigar samples
| 樣品編號 | 茄芯原料形態(tài) | 制作方式 | 包裝形式 |
|---|---|---|---|
| A | 煙束 | 手制 | 木盒 |
| B | 煙束 | 手制 | 紙盒 |
| C | 煙束 | 手制 | 紙盒 |
| D | 煙束 | 手制 | 鐵盒 |
| E | 煙片 | 機制 | 紙盒 |
| F | 煙片 | 機制 | 鐵盒 |
| G | 煙束 | 手制 | 木盒 |
| H | 煙片 | 手制 | 紙盒 |
| I | 煙片 | 手制 | 木盒 |
| J | 煙絲 | 半手制 | 紙盒 |
| K | 煙束 | 手制 | 紙盒 |
| L | 煙束 | 手制 | 木盒 |
| M | 煙束 | 手制 | 紙盒 |
1.2儀器與試劑
Bagmixer®400均質(zhì)器（法國Interscience公司）；HZT-2000電子天平（福州華志科學儀器有限公司）；DZKW-4電子恒溫水浴鍋（北京中興偉業(yè)儀器有限公司）；CL-40M高壓滅菌鍋（日本AUTOCLVAE公司）；SCAN 1200自動菌落計數(shù)器（法國Interscience公司）；VORTEX 1渦旋振蕩器（德國IKA公司）；CTHI-250B2恒溫恒濕箱（上海施都凱儀器設備有限公司）。
孟加拉紅瓊脂培養(yǎng)基（廣東環(huán)凱微生物科技有限公司）；改良馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（按照煙草行業(yè)標準制備）；SYMPHONY Agar快速顯色培養(yǎng)基（法國Solabia集團Biokar公司）；225 mL磷酸鹽緩沖液,無菌培養(yǎng)皿,無菌L型涂布棒,無菌均質(zhì)袋（廣東環(huán)凱微生物科技有限公司）。
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