雪茄煙中霉菌培養基種類篩選、計數方法適用性研究（三）
2.1.3平板涂布法與平板傾注法的比較
GB法（孟加拉紅瓊脂培養基）比較結果如圖10所示，各樣品在兩種接種方式下霉菌計數結果差異均在1個數量級內。通過獨立樣本T檢驗發現7個樣品（A,B,D,E,G,I,J）的平板涂布法與平板傾注法之間存在顯著差異，其中3個低,中濃度樣品（B,D,E）的平板涂布法檢測結果顯著高于平板傾注法，4個中,高濃度樣品（A,G,I,J）的平板傾注法檢測結果顯著高于平板涂布法。53.85%的樣品計數結果存在差異性，表明兩種接種方式間差異較大，對霉菌計數結果有較大影響。
YC/T法（改良馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基）比較結果如圖11所示。4個樣品（B,C,D,E）中平板涂布法與平板傾注法之間存在顯著差異，且3個中,高濃度樣品（B,C,D）的平板涂布法檢測結果顯著高于平板傾注法。30.77%的樣品計數結果存在差異，且主要表現為平板涂布法檢測結果高于平板傾注法，表明兩種接種方式間差異較小，對霉菌計數結果影響不大。
Biokar法（SYMPHONY Agar快速顯色培養基）比較結果如圖12所示，僅有3個樣品（B,C,L）的平板涂布法與平板傾注法之間存在顯著差異。23.08%的樣品計數結果呈現出差異性，且均表現為平板涂布法檢測結果高于平板傾注法，表明兩種接種方式間差異更小，對霉菌計數結果影響較小。
2.2霉菌計數方法的比較
3種霉菌計數方法及兩種接種方式綜合比較結果如表2所示。
表2 霉菌計數方法的比較Tab.2 Comparison of mould counting methods
| 類型 | GB法 | YC/T法 | Biokar法 | |||
|---|---|---|---|---|---|---|
| 平板傾注法 | 平板涂布法 | 平板傾注法 | 平板涂布法 | 平板傾注法 | 平板涂布法 | |
| 培養基 | 孟加拉紅瓊脂培養基 | 預制平板 | 改良馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基 | 預制平板 | SYMPHONY Agar快速顯色培養基 | 預制平板 |
| 前期準備 | 培養基46 ℃±1 ℃水浴保溫 | 預制平板 | 培養基45 ℃±1 ℃水浴保溫 | 預制平板 | 培養基44~47 ℃水浴保溫 | 預制平板 |
| 操作步驟 | 繁瑣 | 便捷 | 繁瑣 | 便捷 | 繁瑣 | 便捷 |
| 培養方式 | 28 ℃±1 ℃恒溫培養 | 28 ℃±1 ℃恒溫培養 | 28 ℃±1 ℃恒溫培養 | 28 ℃±1 ℃恒溫培養 | 25 ℃恒溫培養 | 25 ℃恒溫培養 |
| 培養時間 | 5 d | 5 d | 2~5 d | 2~5 d | 54 h~3 d | 54 h~3 d |
| 菌落生長速率 | 較快 | 較快 | 較快 | 較快 | 較慢 | 較慢 |
| 菌落分布 | 不均勻 | 均勻 | 不均勻 | 均勻 | 不均勻 | 均勻 |
培養基的選擇：平板涂布法接種適用于GB法推薦的孟加拉紅瓊脂培養基和Biokar法推薦的SYMPHONY Agar快速顯色培養基，平板傾注法接種更適用于YC/T法所推薦的改良馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基。無論是霉菌計數結果還是霉菌生長形態，不同培養基的效果不同，在試驗研究過程中可以根據試驗目的選擇不同的培養基。
前期準備及操作步驟：不同計數方法和不同接種方式對于前期準備和操作步驟的要求不同。但各方法間對于平板傾注法接種的前期準備較為相似，均為將培養基在接種前進行水浴保溫，且各水浴溫度要求差異不大，但操作步驟繁瑣。各方法間對于平板涂布法接種的前期準備要求均為提前預制平板，操作步驟便捷。
培養時間：3種霉菌計數方法均為傳統微生物學檢測方法，由于霉菌生長的特殊性及樣品的差異性，各方法中對于培養時間的要求不盡相同。GB法,YC/T法和Biokar法對培養時間的要求分別為5 d,2~5 d和54 h~3 d，GB法與其他兩種方法相比培養周期較長，不利于霉菌快速計數，Biokar法可以在更短的培養時間內實現對樣品中霉菌的計數。
菌落形態：根據圖5和圖9中霉菌生長形態的差異性，無論是培養基還是接種方式的不同，均會影響霉菌菌落形態的觀察，而培養基對霉菌形態的影響明顯大于接種方式。但無論平板涂布法還是平板傾注法接種方式，均表現出GB法所用孟加拉紅瓊脂培養基和YC/T法所用改良馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基更有利于霉菌生長形態的觀察，而Biokar法所用SYMPHONY Agar快速顯色培養基則更有利于霉菌計數。
判讀計數：影響樣品中霉菌判讀計數的因素較多，在培養基和接種方式明確的條件下，菌落生長速率和菌落分布均勻度對于判讀計數有重要影響。由于霉菌生長的特殊性，菌落生長速率較快不利于霉菌計數，稍不注意便會造成菌落蔓延而無法計數。3種培養基進行比較，孟加拉紅瓊脂培養基和改良馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基菌落生長速率較快，不利于霉菌計數，而SYMPHONY Agar快速顯色培養基菌落生長速率較慢，有利于霉菌計數。除霉菌生長速率外，菌落分布均勻性也影響霉菌的判讀計數，而接種方式對于菌落分布的影響更大。平板傾注法接種并培養后，菌落分布不均勻且菌落還可能生長在培養基內部，而平板涂布法接種并培養后霉菌菌落在培養基表面分布均勻,更易于觀察與計數。
3結論
①3種培養基在同種接種方式條件下，雪茄煙中霉菌計數結果的一致性較好，其中Biokar法培養周期短，霉菌生長緩慢，可避免菌落快速蔓延，更利于計數，GB法和YC/T法則更適用于對霉菌菌落的形態觀察。②相同培養基在不同接種方式條件下，雪茄煙中霉菌計數結果存在差異。與平板傾注法相比，平板涂布法操作簡單，霉菌菌落均勻分布于培養基表面，適合大批量樣品檢測。
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