清開靈注射液對(duì)金葡菌生長代謝的抑制作用（二）
2重現(xiàn)性考察
采用微量量熱之停流法測(cè)定金葡菌生長熱譜曲線,在相同的實(shí)驗(yàn)條件下重復(fù)測(cè)定3次,P1、P2、k1、ΔT的RSD值分別為3.468%、4.474%、2.416%和0.941%，說明實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有良好的重現(xiàn)性。
3清開靈注射液不同劑量對(duì)金葡菌代謝的影響
采用同一來源與批號(hào)的樣品(SXTH,071120),分別設(shè)置了0~6.67%(0~200μL)的8個(gè)濃度梯度進(jìn)行考察。由圖2可見，在清開靈濃度范圍0.83%~5.00%時(shí)，清開靈的量與抗金葡菌作用具有良好的線性關(guān)系;當(dāng)清開靈在體系中濃度增加至6.67%時(shí)，金葡菌生長曲線已嚴(yán)重變形，不再適用于指數(shù)生長模型，見圖2曲線h。
4清開靈注射液對(duì)金葡菌生長代謝的抑制作用
藥物對(duì)細(xì)菌的抑制率I=(k0-kv)/k0x100%,式中k0為未加藥物時(shí)細(xì)菌生長代謝的速率常數(shù),kV為細(xì)菌受到劑量為V的藥物抑制時(shí)的速率常數(shù)。由此計(jì)算出金葡菌在清開靈注射液不同濃度下的抑制率I,作V-I(%)圖,求得半數(shù)抑菌濃度為3.26%。當(dāng)k1為0時(shí),細(xì)菌完全停止生長，求得最佳抑菌量為5.47%。細(xì)菌傳代時(shí)間tG=ln(2)/k。詳細(xì)參數(shù)見表1。
Table 1 清開靈注射液不同劑量對(duì)金葡菌生長代謝參數(shù)的影響| C(%) | 指數(shù)生長期 | k1/min?1 | 穩(wěn)定期 | Qt/mJ | ΔT/min | tG/min | I | ||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| T1/min | P1/μW | Q1/mJ | T2/min | P2/μW | Q2/mJ | ||||||
| 0 | 196 | 30.661 | 63.995 | 0.03426 | 444 | 32.468 | 242.125 | 378.011 | 248 | 20.232 | - |
| 0.83 | 204 | 28.305 | 68.863 | 0.02753 | 462 | 30.191 | 278.888 | 402.654 | 258 | 25.178 | 0.196 |
| 1.67 | 206 | 22.403 | 54.885 | 0.02451 | 486 | 26.437 | 268.776 | 359.542 | 280 | 28.280 | 0.285 |
| 2.50 | 210 | 17.789 | 52.341 | 0.02055 | 542 | 22.592 | 285.151 | 374.263 | 332 | 33.730 | 0.400 |
| 3.33 | 212 | 13.664 | 47.857 | 0.01702 | 598 | 19.904 | 299.357 | 388.404 | 386 | 40.725 | 0.503 |
| 4.17 | 216 | 11.373 | 46.272 | 0.01389 | 640 | 18.666 | 322.248 | 408.585 | 424 | 49.903 | 0.595 |
| 5.00 | 220 | 9.194 | 59.504 | 0.00909 | 674 | 16.115 | 369.840 | 492.008 | 454 | 76.254 | 0.735 |
| r | 0.985 | 0.989 | 0.608 | 0.994 | 0.989 | 0.991 | 0.936 | 0.676 | 0.985 | 0.928 | 0.998 |
由清開靈作用下的金葡菌生長代謝圖譜及參數(shù)分析可見，在一定范圍內(nèi)(0~5.00%)，隨清開靈注射液劑量增加，金葡菌生長曲線整體呈“下降、后延”趨勢(shì);細(xì)菌指數(shù)生長期速率常數(shù)k1、最大熱功率P1、穩(wěn)定期最大熱功率P2均相應(yīng)減小;指數(shù)生長期達(dá)峰時(shí)間T1、穩(wěn)定期達(dá)峰時(shí)間T2、穩(wěn)定期與指數(shù)生長期達(dá)峰時(shí)間差△T、藥物對(duì)細(xì)菌抑制率I均相應(yīng)增大,且均與劑量呈較好的線性關(guān)系(r分別為:0.994、0.989、0.991、0.985、0.989、0.985和0.998);細(xì)菌傳代時(shí)間tG也相應(yīng)增加;而細(xì)菌第一指數(shù)生長期發(fā)熱量Q1整體略呈下降趨勢(shì),穩(wěn)定期發(fā)熱量Q2、總發(fā)熱量Q t整體略呈上升趨勢(shì)，但相關(guān)性略差(r分別為0.608、0.936和0.676)。
5不同來源清開靈注射液樣品熱譜圖初步分析
通過上述研究，選擇和空白相比參數(shù)變化較大，但圖譜不發(fā)生明顯變形的濃度(1.67%)，對(duì)不同來源清開靈注射液樣品的抑菌效果進(jìn)行了測(cè)試,結(jié)果見圖3。
圖3中A1、A2和A3為BZY清開靈注射液生長曲線圖,B1、B2和B3為SXTH清開靈注射液生長曲線圖。由圖可見，BZY、SXTH兩個(gè)廠家的樣品對(duì)于金葡菌生長曲線的影響有較大差異，BZY樣品的穩(wěn)定期較SXTH樣品多一個(gè)峰，如圖所示峰b，且P1也較SXTH樣品大。
由圖所示區(qū)域(穩(wěn)定期)可見,BZY批次為811601的樣品(A1)生長曲線明顯區(qū)別于其他樣品(峰a明顯高于其他樣品);SXTH的3批次樣品生長曲線差異較小。
可見,不同廠家及同廠家不同批次的清開靈注射液，其質(zhì)量差異可通過微量量熱法初步表現(xiàn)出來。
討論
本實(shí)驗(yàn)首次通過微量量熱法較系統(tǒng)地研究了清開靈注射液對(duì)金葡菌代謝的影響，印證了文獻(xiàn)報(bào)道的抑菌效應(yīng),并求得清開靈注射液對(duì)金葡菌的半數(shù)抑菌量(3.26%)和最佳抑菌量(5.47%)。結(jié)果顯示，在特定條件下，一定劑量藥物作用于細(xì)菌的生長曲線是相對(duì)穩(wěn)定的，且與其活性相關(guān)，因此稱之為“生物熱活性特征圖譜”(bio-activity fingerprint)。在相同條件下，清開靈注射液不同樣品的生物熱活性特征圖譜存在不同程度的差異，在一定程度上反映了其質(zhì)量的差異性。清開靈注射液作用于金葡菌的生物熱活性特征圖譜提示，微量量熱法在研究清開靈注射液質(zhì)量一致性方面可為評(píng)價(jià)清開靈注射液的質(zhì)量提供思路。
微量量熱檢測(cè)技術(shù)具有普適性好、實(shí)時(shí)在線、客觀靈敏、定性定量、經(jīng)濟(jì)高效等特點(diǎn)，符合中藥藥效與質(zhì)量評(píng)價(jià)的客觀現(xiàn)實(shí)和發(fā)展方向，有利于中藥質(zhì)量控制和藥效評(píng)價(jià)等復(fù)雜性難題，在理論上比現(xiàn)行的中藥指標(biāo)性成分定性定量分析具有較明顯的優(yōu)越性。
本研究僅針對(duì)清開靈注射液的生物活性特征圖譜的建立進(jìn)行了初步探討，生物活性特征圖譜的差異與哪些成分變化直接/間接相關(guān)，在何種程度上影響藥物內(nèi)在質(zhì)量，將進(jìn)行深入探究。
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