犬奇異變形桿菌及其噬菌體分離鑒定、生長曲線及藥敏試驗（一）
奇異變形桿菌（Proteus mirabilis）是一種無莢膜、無芽孢、有鞭毛和菌毛的革蘭氏陰性桿狀細菌，是變形桿菌屬中最重要的病原菌之一。以產(chǎn)生脲酶和固體培養(yǎng)基上形成典型的遷徙運動能力而聞名。奇異變形桿菌是一種腐生性的條件致病菌，分布較廣，可存在于多種環(huán)境中，常見于土壤、污水、動物體表、腸道等部位，能夠引起人和動物傷口、眼睛、呼吸道、胃腸道和尿道等感染。奇異變形桿菌是繼大腸桿菌之后最易引發(fā)人泌尿道感染的細菌，可引起嚴重的泌尿道組織學損傷并與膀胱和腎臟結(jié)石的形成有關(guān)。
近年來，奇異變形桿菌作為人獸共患的病原菌，除了能夠感染人以外，還能感染雞、豬、山羊、水貂、狐貍、恒河猴等多種動物，造成嚴重的經(jīng)濟損失。同時，奇異變形桿菌被證明能夠抵抗多種抗生素和獲得能夠生產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶拓展譜的能力，導(dǎo)致嚴重的公共衛(wèi)生問題。
噬菌體廣泛存在于自然界，是一類可以感染并裂解細菌的病毒。噬菌體具有極強的宿主特異性，除對宿主菌具有裂解作用，不會感染其他正常菌群，對人和動物無害。近年來，噬菌體在防治人和動物疾病、農(nóng)業(yè)生產(chǎn)、食源性感染防治應(yīng)用廣泛。特別是作為一種抗生素替代物或補充治療方法，在控制病原菌的傳播以及治療耐藥性細菌感染等方面取得了巨大的進展。在當下耐藥菌株不斷出現(xiàn)、新型抗菌藥物研發(fā)進展緩慢的狀況下，噬菌體可作為治療感染性疾病的手段再次引起人們的關(guān)注。
前期研究從城市居民區(qū)生活污水中分離出4株奇異變形桿菌的噬菌體，并對其生物學特性進行研究，表明其具有較好的特異性和裂解活性。周祥瑩等以貉源奇異變形桿菌為宿主菌分離出噬菌體，驗證其體外裂解活性，為貉奇異變形桿菌病的防治提供了基礎(chǔ)。研究從感染性結(jié)石犬的尿液中分離到致病菌，通過形態(tài)特征、培養(yǎng)特征、16S rRNA測序等，判定為奇異變形桿菌，并具有較強的耐藥性。再以分離菌株為宿主菌，從污水中分離裂解性噬菌體，命名為vB_PmM_XNR，對其生物學特性進行研究，同時評價裂解性噬菌體對奇異變形桿菌的體外裂解活性，以期為治療和控制奇異變形桿菌感染和研制新型抗菌制劑奠定基礎(chǔ)。
1材料與方法
1.1主要藥品與試劑
LB培養(yǎng)基、營養(yǎng)肉湯、Baird-Parker瓊脂培養(yǎng)基、亞碲酸鈉卵黃增菌液、尿素酶瓊脂基礎(chǔ)培養(yǎng)基購自海博（青島）生物技術(shù)有限公司；細菌基因組提取、DNA純化回收試劑盒購自天根生化科技（北京）有限公司；藥敏紙片購自杭州微生物試劑有限公司；革蘭氏染色試劑盒、透析袋購自索萊寶（北京）科技有限公司；DNA Ladder Marker、PCR Mix，購自近岸蛋白質(zhì)科技有限公司；其他常規(guī)試劑均為分析純。聚乙二醇8000購自生工生物工程（上海）股份有限公司。
電熱恒溫培養(yǎng)箱（上海森信實驗儀器有限公司）；低溫冷離心機（德國艾本德股份公司）；JEM-2100 Plus透射電子顯微鏡（日本電子株式會社）；Bio-Rad S1000TMPCR儀（美國BIO-RAD S1000）。
1.2細菌分離及生物學特性分析
1.2.1細菌分離
病料采自于大慶市農(nóng)大動物醫(yī)院。無菌采取犬膀胱尿液，2 000 r·min-1離心5 min，棄去尿液上清液，將沉淀物接種于Baird-Parker瓊脂培養(yǎng)基和血瓊脂固體培養(yǎng)基上，置37℃培養(yǎng)24 h后，挑取典型菌落進行分離純化，染色鏡檢。
為了進一步觀察分離菌株的形態(tài)特征，取純化的菌液10μL（105CFU·mL-1）置于銅網(wǎng)，靜置15 min左右，用濾紙吸干多余液體，用負染液（2%磷鎢酸溶液）染色5 min，濾紙吸干染液后，用蒸餾水清洗2遍，干燥后置于透射電鏡（JEM-2100 Plus，JEOL，日本）觀察。
1.2.2溶血能力檢測
將分離純化的細菌劃線接種到新鮮配置的血瓊脂培養(yǎng)基（脫纖維羊血5%），置于37℃恒溫培養(yǎng)24～48 h，觀察細菌。
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