金黃色葡萄球菌生長曲線的測定步驟
葡萄球菌是可以在多個平面上分裂，并形成不規則簇的球形革蘭氏陽性細菌。它們存在于所有溫血動物的上呼吸道和其他上皮表面。在20個葡萄球菌種中，具有獸醫學意義的約有4種：金黃色葡萄球菌、中間葡萄球菌、豬葡萄球菌和施氏葡萄球菌凝結亞種。
金黃色葡萄球菌是一種常見的人和幾種動物的化膿性微生物；中間葡萄球菌是一種狗的主要化膿性細菌；已在幾個物種發現了豬葡萄球菌，引起豬滲出性上皮炎，有時引起牛的乳腺炎；施氏葡萄球菌凝血亞種（和中間葡萄球菌），有時與狗的外耳炎相關。下面一起來了解下金黃色葡萄球菌是如何分離出來的。
金黃色葡萄球菌生長曲線的測定：
將-80℃保存的金黃色葡萄球菌甘油凍存液，按1︰100的比例接種到5mL胰蛋白胨大豆肉湯培養基中，37℃、200rpm/min條件下培養至菌液OD600值為0.6左右。
配制兩瓶100mL無菌的胰蛋白胨大豆肉湯培養基，按1︰100的比例將OD600值為0.6左右的種子菌液接種到100mL無菌的胰蛋白胨大豆肉湯培養基，其中一瓶不接種，作為陰性對照組。
于37℃、200rpm/min的恒溫搖床中培養，分別于培養的0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24h取出1mL菌液，在96孔板中每孔加入200μL菌液，每個時間點設置3個復孔，在酶標儀中檢測OD600值，制作金黃色葡萄球菌的生長曲線。選取金黃色葡萄球菌處在穩定生長期的初期階段，進行金黃色葡萄球菌來源OMVs的分離純化。
金黃色葡萄球菌來源OMVs的分離純化：
按1︰100的比例，將100μL金黃色葡萄球菌甘油凍存液無菌接種到10mL無菌胰蛋白胨大豆肉湯培養基中，于37℃、200rpm/min條件下培養至菌液OD600值為0.6左右。將上述250μL金黃色葡萄球菌種子液無菌接種到含250mL含胰蛋白胨大豆肉湯培養基的1L培養瓶中(兩瓶)，于37℃、200rpm/min的恒溫搖床中培養至穩定生長期的初期階段。收集處于穩定生長期初期階段的金黃色葡萄球菌培養液500mL，在4℃，15000g條件下離心20min去除細菌后取上清液，過0.45μm濾膜去除雜質后收集上清液，上清液過0.22μm濾膜后收集上清，將上清經100kD濾膜進行超濾處理，去除蛋白質等大分子雜質，用200μL無菌PBS溶液溶解沉淀物，得到金黃色葡萄球菌來源OMVs的濃縮液。
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