煙草黑脛病菌對氟嗎啉與甲霜靈的藥敏性分析（二）
1.5復配藥劑對解淀粉芽孢桿菌生長速率的影響
利用微生物生長曲線測定儀測定不同濃度的復配殺菌劑對解淀粉芽孢桿菌ZY-9-13菌落生長的影響。將解淀粉芽孢桿菌ZY-9-13在營養肉湯培養液中搖培36 h(30℃，120 r/min)，得到ZY-9-13菌懸液，通過涂板計數法測定菌液濃度為1010 cfu/mL。再取500μL菌液加入到50 mL培養液中搖培6 h(30℃，120 r/min)后備用。配置不同濃度的氟嗎啉與甲霜靈復配殺菌劑，用二甲基亞砜稀釋藥液，使終濃度為6.0μg/mL(約20倍EC50濃度)、3.0μg/mL(約10倍EC50濃度)和0.3μg/mL。在100孔蜂窩板中，每孔加入250 mL營養肉湯培養液、50μL菌液和3μL藥液(空白對照中加入3μL二甲基亞砜)，每個處理重復5次。將蜂窩板放入Bioscreen C測定儀(芬蘭Oy Growth Curves Ab公司)中進行培養，溫度為37℃，每30 min測定一次菌液在600 nm處的吸光值(OD值)。振蕩培養126 h后，比較加藥處理與空白對照對菌液生長的影響。
1.6化學復配藥劑與ZY-9-13協同增效評價方法
聯合毒力測定結果，按氟嗎啉:甲霜靈為1:10的比例進行復配，使復配殺菌劑最終供試濃度為0、0.1、0.3、0.5、1.0和3.0μg/mL，ZY-9-13菌懸液的濃度為1010 cfu/mL，復配殺菌劑與ZY-9-13混合物的濃度依次為0、0.1、0.3、0.5、1.0、3.0μg/mL+1010 cfu/mL。每藥劑處理重復3次，以無藥處理為對照，采用十字交叉法測量菌落直徑，計算各濃度對煙草黑脛病菌的抑制率。采用Abbott數學模型計算復配殺菌劑與生防菌混合使用對病原菌的預期效果。
式中：E為兩種藥劑混合后的理論抑制率，%；X、Y分別為藥劑單獨使用時的實際抑制率，%。
將理論抑制率與實際抑制率相比較，如果理論值＜實際值，表示兩者在復配時存在增效作用；若理論值=實際值，表示兩者為相加作用；若理論值＞實際值，則表示兩者復配時存在拮抗作用。
2結果
2.1煙草黑脛病菌對氟嗎啉的敏感性檢測
從河南省11個地區共分離獲得71株煙草黑脛病菌，藥劑敏感性結果(表1)表明，氟嗎啉對所有供試菌株的EC50值在0.428 5~0.760 8μg/mL，最大的EC50值與最小的EC50值之間相差1.78倍，平均EC50值為0.588 4μg/mL，表明來自河南省不同地區的煙草黑脛病菌對氟嗎啉的敏感性差異不大。其中，平均EC50值最低的菌株來自盧氏，為0.498 7μg/mL，平均EC50值最高的菌株來自汝陽，為0.666 1μg/mL，來自其他地區菌株的EC50值居于兩者之間。71株菌株對氟嗎啉的敏感性頻率分布呈連續單峰曲線(圖1)，表明供試菌株對氟嗎啉敏感，未出現抗藥性亞群體。
圖1 71株煙草黑脛病菌對氟嗎啉的敏感基線
表1河南省不同地區煙草黑脛病菌對氟嗎啉的敏感性比較
2.2氟嗎啉與甲霜靈二元復配對煙草黑脛病菌的聯合毒力評價
分別測定了氟嗎啉與甲霜靈單劑及二者按不同比例復配后對煙草黑脛病菌的毒力作用，結果如表2所示。氟嗎啉與甲霜靈按照不同比例復配后的12個藥劑均能有效抑制煙草黑脛病菌的菌絲生長，EC50值為0.398 7~0.935 2μg/mL，大于甲霜靈單劑的EC50值0.379 3μg/mL，但小于氟嗎啉單劑的EC50值1.179 9μg/mL。
表2氟嗎啉與甲霜靈復配對煙草黑脛病菌的毒力
根據以上單劑和復配藥劑對煙草黑脛病的抑制率，用Wadley法評價氟嗎啉與甲霜靈復配藥劑的聯合作用，結果見表3。12個復配藥劑均具有相加作用，增效系數介于0.665 2~1.013 8之間，其中氟嗎啉與甲霜靈的質量比為1:10或3:20時，增效系數分別為1.013 8和1.012 7，加和效果最為明顯。綜合考慮聯合毒力評價結果、經濟成本等因素，選擇1:10復配比例為最佳。
表3氟嗎啉與甲霜靈復配對煙草黑脛病菌的聯合毒力