制藥廢水生化處理過程中硝化菌分離篩選、生長曲線的測定（一）
在全面控制污染物排放專項整治行動中，原料藥制造行業(yè)屬于十大重點行業(yè)之一，制藥（抗生素、維生素）行業(yè)需嚴格控制其廢水污染物排放。制藥廢水因污染物質組分復雜，氨氮含量高，且包含有生物抑制物、有毒有害物質而難以被微生物自然降解，因此抗生素類制藥廢水的處理是一個棘手問題。在制藥廢水生化處理過程中，脫氮菌是影響生物脫氮效果的關鍵因素，發(fā)掘新型的高效脫氮菌對生物脫氮技術在廢水處理中的運用具有十分重要的意義。
1材料與方法
1.1儀器與試劑
1.1.1實驗儀器
LDZM-80KCS壓力滅菌器，上海申安醫(yī)療器械廠；VS-1900凈化工作臺，蘇州市金凈凈化設備科技有限公司；Applied Biosystems 2720熱循環(huán)儀，美國賽默飛世爾公司；GWA-UN4-F20超純水器，北京普析通用儀器有限公司；FR980凝膠成像儀，上海復日科技儀器有限公司；TH2-C恒溫搖床，太倉市實驗設備廠；FE28型酸度計，瑞士梅特勒-托利多公司；Applied Biosystems 3730XL測序儀，美國賽默飛世爾公司；DT5-6A離心機，北京時代北利離心機有限公司；SHH-250L生化培養(yǎng)箱，重慶康城永生試驗設備有限公司；微生物生長動態(tài)監(jiān)測系統(tǒng),丹麥Biosense公司。
1.1.2試劑
NaCl、MgSO4·7H2O、Na2CO3、CaCO3和NaH2PO4，AR級，成都市科隆化學品有限公司；K2HPO4、KH2PO4、CH3COONa、(NH4)2SO4和MnSO4·H2O，AR級，西隴科學股份有限公司；FeSO4·7H2O、NH4Cl，AR級，國藥集團化學試劑有限公司；無水葡萄糖，AR級，中國惠興生化試劑有限公司。
1.2樣品與培養(yǎng)基
1.2.1樣品來源
活性污泥樣品采集自湖北省宜昌市三峽制藥有限公司生化池。使用前先用純化水進行清洗處理：用250 mL燒杯裝入一半容積的污泥，加入等體積純化水后，玻璃棒攪拌1 min，靜置沉降30 min，去除上層水洗液，重復3次后備用。同時取樣進行宏基因測序，分析目標樣品內微生物結構豐度。
1.2.2培養(yǎng)基
（1）富集培養(yǎng)基。富集培養(yǎng)基A：NH4Cl 0.8 g、NaNO20.5 g、KH2PO44.0 g、MgSO4·7H2O 0.4 g和Na2CO30.8 g，加水2 000 mL，pH 7.4，121℃高溫滅菌15 min。富集培養(yǎng)基B：NaNO22 g、NaCl 1 g、K2HPO41 g、MgSO4·7H2O 1 g、FeSO40.8 g和Na2CO32 g，加水2 000 mL，pH 7.8，121℃高溫滅菌15 min。
（3）硝化培養(yǎng)基培養(yǎng)基。NH4Cl 0.4 g、NaCl 0.12 g、K2HPO40.2 g、CH3COONa 2 g、MgSO40.05 g、MnSO40.01 g和FeSO40.01 g，加水1 000 mL，調節(jié)pH值7.2，添加18 g/L的瓊脂，121℃高溫滅菌15 min。
（4）反硝化培養(yǎng)基。NaNO20.05 g、NaCl 3 g、KH2PO42 g、CH3COONa 1 g、NaH2PO43 g和無水葡萄糖10 g，加水1 000 mL，調節(jié)pH值7.2，添加18 g/L的瓊脂，121℃高溫滅菌15 min。
1.3硝化菌富集培養(yǎng)及硝化菌分離
取經(jīng)過前處理的活性污泥20 mL分別加入裝有100 mL無菌富集培養(yǎng)基的250 mL三角瓶中。30℃、180 r/min恒溫搖床中富集培養(yǎng)72 h；轉接后，再次富集。將富集液進行梯度稀釋（10-2～10-4）后，分別涂布于、硝化和反硝化固體培養(yǎng)基上，30℃恒溫培養(yǎng)至出現(xiàn)明顯單菌落。
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