低聚果糖在體外對(duì)大腸桿菌、嗜酸乳桿菌生長(zhǎng)曲線的影響（一）
摘要:通過(guò)培養(yǎng)基中添加不同劑量的低聚果糖，探究低聚果糖在體外對(duì)大腸桿菌和嗜酸乳桿菌生長(zhǎng)影響。試驗(yàn)將低聚果糖按照20g/L、30g/L和40g/L的添加量進(jìn)行添加，作為培養(yǎng)基唯一碳源;進(jìn)行活菌平板計(jì)數(shù)，測(cè)定其OD值，繪制生長(zhǎng)曲線。試驗(yàn)結(jié)果表明，低聚果糖能抑制大腸桿菌生長(zhǎng)，促進(jìn)嗜酸乳桿菌生長(zhǎng)。濃度為30g/L的低聚果糖對(duì)大腸桿菌抑制作用及對(duì)乳酸桿菌的促進(jìn)作用與20g/L、40g/L添加組比較，差異顯著(P<0.05)。
低聚果糖是蔗糖分子以β-1，2糖苷鍵結(jié)合多重D-果糖形成，是一種水溶性糖，甜度低，安全，性能穩(wěn)定，不為內(nèi)源酶所水解的化合物，耐酸性和熱穩(wěn)定性較高，在pH4.0~7.0范圍內(nèi)高度穩(wěn)定。固體低聚果糖為白色粉末甜度比蔗糖低其廣泛存在于自然界的小麥、馬鈴薯、大蒜、洋蔥、香蕉等植物中。研究證明，低聚果糖在單胃動(dòng)物前段結(jié)腸中能被厭氧微生物很好地發(fā)酵利用，發(fā)揮益生作用。
動(dòng)物機(jī)體內(nèi)寄居種類多樣的微生物，其中細(xì)菌占主導(dǎo)地位，所有腸道內(nèi)的細(xì)菌統(tǒng)稱為腸道菌群。腸道菌群可分為兩大類:益生菌和致病菌，益生菌是一類能夠抑制有害菌生長(zhǎng)，改善宿主腸道微生態(tài)平衡，對(duì)宿主身體健康有益的細(xì)菌，如乳酸桿菌。乳酸桿菌通過(guò)抑菌、加強(qiáng)宿主免疫力、競(jìng)爭(zhēng)營(yíng)養(yǎng)以及競(jìng)爭(zhēng)腸道有害菌的附著位點(diǎn)等對(duì)腸道致病菌產(chǎn)生抑菌效果。多數(shù)大腸桿菌在宿主健康狀態(tài)下在腸道內(nèi)不致病，特定條件下如移位侵入腸外組織或器官，引起發(fā)病。
本研究擬通過(guò)體外培養(yǎng)試驗(yàn)，篩選出低聚果糖對(duì)腸道大腸桿菌和嗜酸乳桿菌抑制或增值作用的最佳濃度，評(píng)價(jià)低聚果糖對(duì)兩菌種的增殖或抑制影響，為低聚果糖臨床應(yīng)用上的推廣提供科學(xué)依據(jù)。
1材料與方法
1.1實(shí)驗(yàn)菌種
大腸桿菌O78(CVCC1569)、嗜酸乳桿菌:廣州華農(nóng)大實(shí)驗(yàn)獸藥有限公司研發(fā)中心保藏菌株。
1.2實(shí)驗(yàn)試劑
低聚果糖由江門量子高科生物股份有限公司提供，MRS肉湯培養(yǎng)基、LB肉湯培養(yǎng)基均購(gòu)自廣東環(huán)凱生物科技有限公司;去離子水自制。
1.3主要實(shí)驗(yàn)儀器
主要儀器有超凈工作臺(tái)(蘇州凈化SWCJ-1FD)、雙目顯微鏡(L1100A)、酶標(biāo)儀(Multiskan MK3)、pH測(cè)定儀(STARTER2100)、微量移液器、離心機(jī)(TGL-16G)、微型振蕩器(XW-80A)。
1.4實(shí)驗(yàn)方法
1.4.1菌株活化及菌懸液制備
嗜酸乳桿菌接種MRS肉湯培養(yǎng)基，于37±1℃恒溫培養(yǎng)箱厭氧培養(yǎng)48h，大腸桿菌接種LB肉湯培養(yǎng)基中，于37±1℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)16~24h，菌懸液備用。
1.4.2培養(yǎng)基處理
試驗(yàn)組培養(yǎng)基:在不含糖的MRS肉湯培養(yǎng)基，MRS固體培養(yǎng)基，麥康凱培養(yǎng)基和LB肉湯培養(yǎng)基中分別加入20g/L、30g/L、40g/L的低聚果糖，121℃，30min高壓滅菌，備用。
對(duì)照組培養(yǎng)基:用含糖的MRS肉湯培養(yǎng)基、MRS固體培養(yǎng)基、LB肉湯培養(yǎng)基、麥康凱培養(yǎng)基培養(yǎng)基為對(duì)照組，121℃，30min高壓滅菌，備用。
1.4.3大腸桿菌活菌平板計(jì)數(shù)
用無(wú)菌移液器吸取活化好的大腸桿菌菌懸液1mL，沿試管壁注入含9mL無(wú)菌水的試管中，震蕩試管均勻混合，制成10倍稀釋菌液，重復(fù)操作依次進(jìn)行10倍梯度稀釋，將大腸桿菌稀釋至10??;移取1mL10??大腸桿菌稀釋液于滅菌平皿中，每個(gè)稀釋度做3個(gè)平行，將冷卻至46℃左右的麥康凱培養(yǎng)基注入平皿約15~20mL，轉(zhuǎn)動(dòng)平皿，混合均勻。置36±1℃溫箱內(nèi)倒置培養(yǎng)24h。
1.4.4嗜酸乳桿菌活菌平板計(jì)數(shù)
用無(wú)菌移液器吸取活化好的嗜酸乳桿菌菌液1mL，同“1.4.3大腸桿菌活菌平板計(jì)數(shù)”操作，將嗜酸乳桿菌稀釋至10??。移取1mL10??嗜酸乳桿菌稀釋液于滅菌平皿中，每個(gè)稀釋度做3個(gè)平行，將冷卻至46℃左右的MRS瓊脂培養(yǎng)基注入平皿約15~20mL，轉(zhuǎn)動(dòng)平皿，混合均勻，置36±1℃溫箱內(nèi)倒置厭氧培養(yǎng)48h。
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