10-十一烯酸聯合硫酸多黏菌素E的協同殺菌效果【試驗】
摘要: 本文內容主要涉及10?十一烯酸聯合多黏菌素在制備抗菌藥物中的應用，抗菌藥物針對的細菌為大腸桿菌、沙門菌、肺炎克雷伯菌中的一種或多種。抗菌藥物針對的細菌為耐多黏菌素的細菌。所述抗菌藥物針對的細菌為多重耐藥革蘭陰性細菌。通過棋盤法最小抑菌濃度試驗、體外細菌生長曲線證明10?十一烯酸協同增效多黏菌素的抗菌活性，提供10?十一烯酸在增效多黏菌素類抗生素抗菌活性中的新用途，可解決多黏菌素臨床耐藥性和治療指數低等技術問題。
革蘭陰性菌是臨床常見的病原菌，嚴重影響人類健康與畜禽健康養殖。多黏菌素是治療多重耐藥革蘭陰性菌感染的重要抗菌藥物之一，然而，近年來，由于臨床治療中不規范用藥，導致耐藥菌的出現，嚴重削弱了多黏菌素的臨床治療效果。近年來，新的抗菌藥物研發停滯不前，利用現有藥物恢復現有抗生素的效果是一種經濟有效的手段。10-十一烯酸是一種單鏈不飽和脂肪酸，天然存在于人體汗液中，在臨床已被廣泛用于抗真菌治療，能有效抑制真菌的繁殖，常用于治療頭癬、股癬、足癬等皮膚真菌感染及真菌性陰道炎，能有效抑制白念珠菌的生物膜形成；此外，有研究表明，10-十一烯酸與L-精氨酸聯用后能誘導濃度依賴性腫瘤細胞死亡。迄今為止，10-十一烯酸作為抗菌佐劑增效抗菌藥物的抗菌活性尚未見報道。
為了解決多重耐藥革蘭陰性細菌治療的技術問題，本文提供一種增強多黏菌素抗菌活性的方法，具體采用10-十一烯酸聯用多黏菌素，多黏菌素優選硫酸多黏菌素E，二者不僅是簡單的功能相加，而是達到協同增效抗菌作用。文末附10-十一烯酸和硫酸多黏菌素E的抗菌組合配比，為臨床治療細菌感染，特別是多重耐藥革蘭陰性細菌感染，具體如存在多黏菌素耐藥基因(MCR)的細菌感染提供了新的治療策略。
10-十一烯酸(10-Undecenoic acid)，CAS號：112-38-9，分子式：C11H20O2，分子量：184.28，購買自上海阿拉丁生化科技股份有限公司，純度為95％；稱取一定量的10-十一烯酸使用DMSO配制成濃度為100mg/mL的10-十一烯酸母液，-20℃保存；
硫酸多黏菌素E(硫酸粘桿菌素，Colistin)，CAS號：1264-72-8，分子式：C52H100N16O17S，分子量：1253.53，購買于上海阿拉丁生化科技股份有限公司，純度≥19，000U/mg；稱取一定量的硫酸多黏菌素E配制成濃度為2mg/mL的硫酸多黏菌素E母液，-20℃保存；
使用的細菌培養基：
CAMHB肉湯培養基購自BD碧迪醫療器械(上海)有限公司，配制方法如下：稱取22.0g于1L蒸餾水中，加熱煮沸至完全溶解，121℃高壓滅菌15min，備用；
MH瓊脂培養基購自北京陸橋技術股份有限公司，配制方法如下：稱取38.0g于1L蒸餾水中，加熱煮沸至完全溶解，121℃高壓滅菌15min，冷至50℃傾注平板備用；
腦心浸液培養基(BHI肉湯培養基)購自北京陸橋技術股份有限公司，配制方法如下：稱取本品24.5g，加熱攪拌溶解于1L蒸餾水中，121℃高壓滅菌15min，備用。
10-十一烯酸聯合硫酸多黏菌素E的協同殺菌分析：
時間殺菌曲線試驗：
挑取大腸桿菌B2單菌落至BHI肉湯培養基中培養至對數生長期后備用，CAMHB肉湯培養基加入10-十一烯酸、硫酸多黏菌素E、10-十一烯酸和硫酸多黏菌素E混合液，加入菌液使初始菌量為1×106CFU/mL；
分組和劑量如下：
對照組(control)：只含菌液，10-十一烯酸、硫酸多黏菌素E終濃度為0；
10-十一烯酸(10-Undecenoic acid)：10-十一烯酸終濃度分別為2.5mg/mL；
硫酸多黏菌素E組(Colistin)：硫酸多黏菌素E終濃度分別為4μg/mL；
10-十一烯酸和硫酸多黏菌素E聯合組：終濃度為2.5mg/mL 10-十一烯酸+4μg/mL硫酸多黏菌素E。
將培養液充分混勻后，置于恒溫培養箱中，37℃靜置培養。分別于第1h、3h、6h、12h和24h取100μL菌液涂布于直徑為10cm的MH瓊脂培養板上，培養過夜后進行菌落計數。
試驗結果：
圖10-十一烯酸聯合硫酸多黏菌素E對大腸桿菌B2的協同殺菌結果
如圖所示，針對大腸桿菌B2菌株，與對照組相比，硫酸多黏菌素E單獨處理對細菌菌落數沒有顯著影響，10-十一烯酸單獨使用后會使活菌數減少，但與對照組相比，活菌數減少程度較弱；當10-十一烯酸和硫酸多黏菌素E聯合處理時，細菌活菌落數較對照組與10-十一烯酸或硫酸多黏菌素E單獨處理組顯著降低，在第1h時，活菌落數能降至0Log10
CFU/mL，即該組合濃度下能快速有效殺死細菌；
這些數據表明，10-十一烯酸和硫酸多黏菌素E聯合處理后對大腸桿菌具有明顯的協同殺菌功能。
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