鏈霉菌培養基的配制步驟及生長曲線的測定方法
一種鏈霉菌培養基的配制步驟、生長曲線的測定方法，包括以下步驟：
⑴鏈霉菌活化培養：將保藏于-80℃冰箱中的鏈霉菌涂布在MS固體平板培養基上，并在28℃培養箱中培養7天，即得平板菌種；
⑵鏈霉菌液體培養及時間梯度取樣：在生長良好的平板菌種上取1cm2的孢子接種于裝液量為10%的高氏一號液體培養基中，在28℃、160rpm的條件下培養；接種后每12h取一次樣品，均勻分散菌絲體后使用去除尖端的1mL移液器吸頭吸取菌液1mL，每個時間梯度取樣設置三個平行；
⑶配制TTC溶液：稱取2,3,5-氯化三苯基四氮唑粉末0.1g，放置在避光的離心管中，加入10mL濃度為10mg/mL的常溫保存的PBS溶解，過濾除菌后每200μL TTC溶液分裝在1.5mL的離心管中；⑷鏈霉菌與TTC反應：將TTC溶液以1%比例加入到步驟⑵取出的不同時間段樣品中，室溫避光反應30min，此時TTC反應后反應液中生成紅色沉淀三苯基甲臢；
⑸吸光度測定：將反應液離心、去除上清并收集沉淀；隨后向該沉淀中加入500μL二甲基亞砜溶液，室溫避光溶解30min，形成紅色溶液，該紅色溶液離心后取上清液各200μL，加入96孔板中，以DMSO溶液作為空白對照，用酶聯免疫檢測儀在490nm波長處測定其吸光度；
⑹生長曲線繪制：每個時間段樣品的吸光度設置三個平行，使用AVERAGE函數求平均值，使用STDEVP函數計算標準誤差；然后以測定時間為X軸，以490nm處的吸光值為Y軸，繪制散點圖，對散點圖進行非線性擬合，繪制生長曲線并得到擬合方程。
相關新聞推薦
1、微生物計數：從顯微鏡視野法到μCount3D微生物立體計數儀的轉換
3、Biosense微生物動態監測系統實驗操作步驟——膿腫分枝桿菌的生長曲線