熒光分光光度法測定硫酸鹽還原菌SRB菌株標準曲線、生長曲線
煤層氣生物工程技術是通過往煤層中注入激活劑或者微生物來產生以甲烷為主要成分的氣體的生物增采技術，具有很好的應用前景。煤的生物產氣環境中，微生物為了從煤中獲取能源底物會選擇性吸附到煤表面形成生物膜，其吸附成膜是微生物啟動煤厭氧降解產氣的先決條件，也是煤厭氧降解產氣過程中的關鍵環節，通過調控微生物在煤表面的吸附率，可以促進煤的生物產氣量。
硫酸鹽還原菌是煤厭氧降解產氣體系中重要的功能微生物種群，在煤厭氧降解生物產氣前可以在煤表面形成生物膜，改變煤的表面性質，影響煤表面有機成分含量及物質結構，為體系中其他產甲烷功能菌提供豐富的前體物質，在產氣體系中發揮關鍵作用。改變煤表面吸附微生物的數量，可以影響煤的厭氧降解產氣效率。因此，如何快速準確測定微生物在煤表面的吸附率對了解煤表面生物膜的形成過程，強化煤層氣的產生效率具有重要意義。
目前表征微生物在礦物表面吸附的方法有比濁法、茚三酮比色法，分光光度計法等，這些方法主要用來檢測好氧微生物在礦物表面的吸附。而煤生物厭氧降解產氣體系中的微生物均是厭氧微生物，對氧氣敏感，并且煤經微生物厭氧降解后會形成微米級的煤顆粒，這會對傳統的測定好氧微生物在礦物表面吸附率的方法造成干擾。所以，需要開發一種能適合測定厭氧微生物如硫酸鹽還原菌在煤表面吸附率的方法。
通過特異性的熒光染料與微生物結合可避免煤顆粒對吸光度的干擾。但是，熒光測定體系的準確度會受到多種因素影響，為了提高其準確度，需要開發出合適的測試體系。
為了解決測定厭氧微生物硫酸鹽還原菌在煤表面吸附率問題，下面通過正交試驗法優化了熒光分光光度法的測試體系，通過SRB菌株標準曲線、生長曲線和在褐煤表面吸附率的測定進行方法驗證，表明該方法具有特異性強、準確度和精密度都較高的優點。
熒光分光光度法測定硫酸鹽還原菌培養體系中菌液濃度的標準曲線
在厭氧手套箱中，將對數生長期的SRB培養液按照10％接種量接種到新的厭氧培養瓶中，接種完成后進行SRB細胞培養，每隔24h取出1.5mL樣品，按照步驟7中最優條件測定樣品中細胞的熒光強度；同時用血細胞計數板法計數分析培養液中SRB的細胞濃度；以時間為橫坐標，菌體濃度和熒光強度為縱坐標，在同一坐標軸內建立熒光強度隨時間變化曲線及SRB細胞濃度隨時間變化的生長曲線，驗證熒光強度與細胞濃度變化的對應關系。
通過在厭氧環境下對待測樣品進行處理，使用熒光分光光度法并控制吖啶橙與十二烷基磺酸鈉用量對硫酸鹽還原菌的熒光值進行測定。通過使用密閉比色皿可以保持在檢測過程中的厭氧環境，維持厭氧菌活性，結合血細胞計數板法繪制標準曲線，可實現硫酸鹽還原菌在煤表面吸附率的快速測定。該方法可實現對厭氧環境中微生物數量的快速檢測，并保持微生物活性，適用于多種類型的厭氧微生物，具有操作簡便、快速、準確等優點。
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