微生物培養基的制備、分類及用途
本文主要介紹微生物培養基的制備、分類及用途等知識。
（一）培養基的配制
1．培養基的化學成分包括水、無機鹽、碳源、氮源（基本成分）和生長因子等。
（1）碳源：能為微生物的代謝提供碳元素的物質。如CO2、NaHCO3等無機碳源；糖類、石油、花生粉餅等有機碳源。異養微生物只能利用有機碳源。單質碳不能作為碳源。
（2）氮源：能為微生物的代謝提供氮元素的物質。如N2、NH3、NO、NH等無機氮源；蛋白質、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨等有機氮源。只有固氮微生物才能利用N2。
（3）水
（4）無機鹽
（5）生長因子：微生物生長繁殖所必需的，但自身不能合成或合成能力有限，如維生素，氨基酸，堿基等。培養某些微生物時可以不用添加生長因子。
另外，培養基還要滿足微生物生長對pH、特殊營養物質以及氧氣的要求。例如，培養乳酸桿菌時需要在培養基中添加維生素，培養霉菌時，一般需將培養基的pH調至酸性；培養細菌時，一般需要將pH調至中性或弱堿性；培養厭氧微生物時，則需要提供無氧的條件。（P10）
2．培養基的種類及用途：
（1）按物理性質可分為液體培養基、半固體培養基和固體培養基。液體培養基應用于工業或生活生產，固體培養基應用于微生物的分離和鑒定，半固體培養基則常用于觀察微生物的運動及菌種保藏等。
（2）按照培養基的用途，可將培養基分為選擇培養基和鑒別培養基。
（二）無菌技術
1．獲得純凈培養物的關鍵是防止外來雜菌的入侵，要注意以下幾個方面：
①對實驗操作的空間、操作者的衣著和手，進行清潔和消毒。
②將用于微生物培養的器皿、接種用具和培養基等進行滅菌。
③為避免周圍環境中微生物的污染，實驗操作應在酒精燈火焰附近進行。
④實驗操作時應避免已經滅菌處理的材料用具與周圍的物品相接觸。
無菌技術除了用來防止實驗室的培養物被其他外來微生物污染外，還能有效避免操作者自身被微生物感染。
2．消毒
（1）消毒指使用較為溫和的物理、化學或生物等方法殺死物體表面或內部一部分微生物（不包括芽孢和孢子）。
（2）消毒方法常用到煮沸消毒法，巴氏消毒法（對于一些不耐高溫的液體），還有化學藥劑消毒（如酒精、氯氣、石炭酸等）、紫外線消毒。（P10）
3．滅菌
（1）滅菌是指使用強烈的理化方法殺死物體內外所有的微生物，包括芽孢和孢子。
（2）滅菌方法有灼燒滅菌、干熱滅菌、濕熱滅菌。
①接種環、接種針、試管口等使用灼燒滅菌法；
②玻璃器皿、金屬用具等使用干熱滅菌法，所用器械是干熱滅菌箱；
③培養基、無菌水等使用高壓蒸汽滅菌法，所用器械是高壓蒸汽滅菌鍋。（P10～P11）
4．比較消毒和滅菌
（三）微生物的純培養
1．微生物的純培養包括配制培養基、滅菌、接種、分離和培養等步驟。
2．分散的微生物在適宜的固體培養基表面或內部可以繁殖形成肉眼可見的、有一定形態結構的子細胞群體，這就是菌落。采用平板劃線法和稀釋涂布平板法能將單個微生物分散在固體培養基上，之后經培養得到的單菌落一般是由單個微生物繁殖形成的純培養物。
3．通過接種環在固體培養基表面連續劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養基的表面。經數次劃線后培養，可以分離得到單菌落。平板劃線的具體操作見下面的流程圖。
4．培養基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養基的溫度？
可以用手觸摸盛有培養基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進行倒平板了。
5．為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？
通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養基。
6．平板冷凝后，為什么要將平板倒置？
平板冷凝后，皿蓋上會凝結水珠，凝固后的培養基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以減少使培養基中的水分過快地揮發，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養基，造成污染。
7．在倒平板的過程中，如果不小心將培養基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養微生物嗎？為什么？
不能。因為空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養基上滋生，因此不能用這個平板培養微生物。
8．為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環？在劃線操作結束時，仍然需要灼燒接種環嗎？為什么？
操作的第一步灼燒接種環是為了避免接種環上可能存在的微生物污染培養物；每次劃線前灼燒接種環是為了殺死上次劃線結束后，接種環上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數的增加，使每次劃線時菌種的數目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結束后灼燒接種環，能及時殺死接種環上殘留的菌種，避免細菌污染環境和感染操作者。
9．在灼燒接種環之后，為什么要等其冷卻后再進行劃線？
以免接種環溫度太高，殺死菌種。
10．在第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？
劃線后，線條末端細菌的數目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數目隨著劃線次數的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。
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