茯磚茶中金花菌菌落標準計數(shù)方法優(yōu)化條件【試驗】（一）
茯磚茶內(nèi)部或表面存在大量金黃色顆粒狀物質(zhì)，俗稱“金花”；其數(shù)量的多少是判斷茯磚茶品質(zhì)好壞的重要指標。由于地域的差異性，金花菌具有多樣性，但大都以冠突散囊菌為主，還包括謝瓦式散囊菌、阿姆斯特丹散囊菌、間型散囊菌及肋狀散囊菌等。其子囊果均為閉囊殼型，他們的共同特征是：培養(yǎng)前期（5 d～6 d），菌落質(zhì)地緊密，中心顏色為黃色或棕褐色，周邊為淺黃色。目前，對金花菌的檢測一般均采用GB/T 4789.15-2016《食品安全國家標準食品微生物學檢驗霉菌和酵母計數(shù)》，該方法針對的是食品中霉菌和酵母菌的計數(shù)，而金花菌閉囊殼很難破裂，形成的菌落可能是2個～3個或更多個孢子生長發(fā)育而成，因此采用國標方法并不能準確地反映茯磚茶中金花菌的數(shù)量。
本試驗通過響應面法建立多元二次回歸方程來擬合因素與響應值之間的函數(shù)關(guān)系，充分考慮各因素之間的影響，通過前處理條件使金花菌閉囊殼充分破裂釋放子囊孢子，從而得到金花菌菌落總數(shù)計數(shù)的優(yōu)化條件，為以后建立茯磚茶中金花菌標準計數(shù)方法提供試驗依據(jù)。
1材料與方法
1.1材料與設(shè)備
原料：茯磚茶，由咸陽涇渭茯茶有限公司提供。
FW100高速萬能粉碎機：天津泰斯特儀器有限公司；LDZX-50KBS立式壓力蒸氣滅菌鍋：上海申安醫(yī)療器械有限公司；SW-CJ-ID單人單面凈化工作臺：上海樹立儀器儀表有限公司；GHP-90隔水式恒溫培養(yǎng)箱：上海一恒科技有限公司；HZQ-C雙層空氣浴振蕩器：哈爾濱東聯(lián)電子技術(shù)開發(fā)有限公司。
培養(yǎng)基：孟加拉紅培養(yǎng)基，按GB/T 4789.15-2016配制。
1.2方法
1.2.1樣品的準備
采用GB/T 8302-2013《茶取樣》方法取樣。將整塊茶磚撬碎混勻，取部分混勻茶樣粉碎后備用，部分不粉碎茶樣作為對照樣品。
1.2.2菌落計數(shù)方法
采用GB/T 4789.15-2016方法。取已準備好的茶樣25.00 g于裝有無菌稀釋液的三角瓶中（內(nèi)含200顆玻璃珠），經(jīng)振搖后進行梯度稀釋，孟加拉紅培養(yǎng)基傾注平板，平板于（28±1）℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)，第5天計數(shù)并拍照記錄。
1.2.3單因素試驗
1.2.3.1篩子目數(shù)對金花菌菌落總數(shù)的影響
茶樣粉碎，分別過篩40、50、60、70、80、90目，分別稱取過篩后的茶樣25.00 g于無菌蒸餾水中，振搖30 min（200 r/min）后進行梯度稀釋，孟加拉紅培養(yǎng)基傾注平板，（28±1）℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)，第5天計數(shù)。
1.2.3.2無菌稀釋液濃度對金花菌菌落總數(shù)的影響
稱取過篩60目的茶樣25.00 g，分別加入無菌的蒸餾水、0.45%NaCl、0.85%NaCl、1.25%NaCl、1.65%NaCl、磷酸緩沖溶液中稀釋，振搖30 min（200 r/min）后進行梯度稀釋，孟加拉紅培養(yǎng)基傾注平板，（28±1）℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)，第5天計數(shù)。
1.2.3.3振搖時間對金花菌菌落總數(shù)的影響
稱取過篩60目的茶樣25.00 g于無菌蒸餾水中，在轉(zhuǎn)速為200 r/min條件下，分別振搖20、30、40、50、60、70 min后，進行梯度稀釋，孟加拉紅培養(yǎng)基傾注平板，（28±1）℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)，第5天計數(shù)。
1.2.4響應面試驗
在單因素試驗基礎(chǔ)上，以篩子目數(shù)、NaCl濃度、振搖時間為自變量，以金花菌菌落總數(shù)為響應值進行響應面試驗，中心試驗重復5次，共17個試驗點，試驗設(shè)計如表1所示。
表1因素水平表
2結(jié)果與分析
2.1單因素試驗結(jié)果
2.1.1篩子目數(shù)對金花菌菌落總數(shù)的影響
篩子目數(shù)對金花菌菌落總數(shù)的影響見圖1。
圖1篩子目數(shù)對金花菌菌落總數(shù)的影響
由圖1可知，篩子目數(shù)對金花菌菌落總數(shù)影響顯著。隨著篩子目數(shù)的減小，金花菌菌落總數(shù)呈增長趨勢，篩子目數(shù)從40目至80目，金花菌菌落總數(shù)呈直線增長，篩子目數(shù)為80目時，其菌落總數(shù)為（45.8±1.5）×105CFU/g；80目至90目，金花菌菌落總數(shù)趨于平緩，原因可能是高速粉碎機在粉碎過程中高速撞擊并產(chǎn)生熱量，當粉碎時間過長時容易導致金花菌孢子結(jié)構(gòu)被破壞而失活。因此，篩子目數(shù)選用80目。