絲狀真菌生長曲線測定方法及其測定裝置
微生物生長時期一般分為：遲緩期、對數期、穩定期、衰亡期。一般常規的細菌等微生物，可以直接比濁法來測定其生長曲線。一般具有菌絲的真菌，也有很多測定方法，如離心稱重法、菌絲濃度法、菌絲長度測量法。離心稱重法由于每隔一段時間就需要取出全部離心稱量，耗時長，且稱重后，培養物就沒有了，測定生長曲線的時候，若使用離心稱重法，便在初始的時候，就需要配制很多數量的培養基，同時接種，且離心稱重法有可能因為每瓶個體的不同，會有誤差；菌絲濃度法是通過測定一定體積培養液中所含菌絲的量來反映微生物的生長狀況，但由于該方法相對粗放簡便，離心沉淀物中夾雜有一些固體營養物，從而易導致結果出現偏差；菌絲長度測量法則是在培養基上測定一定時間內菌絲生長的長度，或是利用一只一端開口并帶有刻度的細玻璃管，到入合適的培養基，臥放，在開口的一端接種微生物，一段時間后記錄其菌絲生長長度，借此衡量絲狀微生物的生長，該方法操作相對復雜，且對無菌環境要求高。
本文提供一種絲狀真菌生長曲線測定方法及其測定裝置，具有操作簡便快捷，對菌體生長影響小、準確性高的特點。
一種絲狀真菌生長曲線測定裝置，包括：
培養裝置1、測量筒4及承載架6；
所述培養裝置1上設有培養裝置液位刻度線2，內設有第一液體擋板7及第二液體擋板8，頂部開有瓶口3；
所述測量筒4上設有測量筒液位刻度線5及實心管401；
所述承載架6通過嵌套的方式固定于實心管401上。
此技術方案特征在于，所述測定裝置成分為玻璃、高分子材料或具有可視刻度窗口便于測定的不銹鋼，所述測定裝置中的測量筒(4)為圓柱形的測量筒或六棱柱形的測量筒。
一種利用上述測定裝置測定絲狀真菌生長曲線的方法，包括以下步驟：
W1.配制一定體積的液體培養基，并記錄此時體積為V培；
W2.使培養裝置1的底面與水平面平行，將液體培養基從瓶口3處倒入培養裝置1中，并用透氣硅膠塞塞好或紗布加牛皮紙包好瓶口3，然后進行濕熱滅菌；
W3.濕熱滅菌結束后，取出裝置并使其自然冷卻至室溫后，在超凈工作臺中接入菌種，菌種密度為>109CFU/g，此時得到含有菌種的液體培養基；
W4.將裝置翻轉使承載架6的底面與水平面平行，使含有菌種的液體培養基從培養裝置1中流入測量筒4中，待自然沉降10～20min，此時含有菌種的液體培養基出現明顯分層，上層為液體培養基層下層為菌種層，讀取此時菌種層的體積，記錄為V0；
W5.記錄完畢后，拆下承載架6，把裝置正放使培養裝置1的底面與水平面平行，然后放入搖床中培養；
W6.每培養一段時間取出測量，將裝置翻轉使承載架6的底面與水平面平行，使含有菌種的液體培養基從培養裝置1中流入測量筒4中，待自然沉降2～4min，此時含有菌種的液體培養基出現明顯分層，上層為液體培養基層下層為菌種層，讀取此時菌種層的體積，記錄為Vt。
如圖中所示，V/mL曲線為利用本裝置測量的生長曲線，G/g曲線為利用常規的離心稱重法測的生長曲線。從V/mL曲線中，可以看出約在12h之前為延滯期，12h后米曲霉開始較快速生長，12～32小時為對數生長期，在32h左右進入穩定期。這一結論基本也可以從G/g曲線中得出，從而驗證本裝置測量方法的有效性以及科學性。
所提供的測定方法及測定裝置只需要配置幾瓶用于平行實驗數據結果的培養基，并接種培養即可，具有操作簡單，耗時短，經濟性好，且測量的數據都來源于同一瓶的數據，準確性更強的效果，可以在極短的時間內給科研人員相應的絲狀真菌生長狀態指導。
測定方法中所提供的助劑，可以加快絲狀真菌在測量筒4中的沉降速度。助劑中的乙酰化酶和乙酰輔酶A對絲狀真菌的細胞壁進行乙酰化修飾，乙酰化酶通過將乙酰輔酶A的乙酰基轉移到細胞壁表面上的氨基酸殘基上，提高其菌絲的疏水性，從而使得裝置從搖床中取出測定絲狀真菌生長情況時，由于脫離了搖床的振動，其菌絲的疏水性可使其快速沉降于測量筒4的底部，大大減少了測定的耗時，一定程度上減少了取出測試時對絲狀真菌生長的影響，確保其生長的連續性；另助劑中的聚乙烯醇可以一定程度上減少絲狀真菌菌絲的粘附性，使得在搖床中振動培養時絲狀真菌在液體培養基中分散得更均勻，減少了菌絲間因粘附成團從而影響其正常生長。
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