特雷唑來與其他抗結核藥物聯用使用對結核分枝桿菌的生長抑制作用——資料與方法
目的評價特雷唑來對不同耐藥類型的結核分枝桿菌臨床分離株的體外抑菌作用，為臨床應用提供實驗依據。方法采用微孔板觀察法，測定特雷唑來對標準株H37Rv及臨床分離的敏感、單耐藥、多耐藥、耐多藥以及廣泛耐藥各20株(共100株)的MIC，再測定特雷唑來與7種常用抗結核藥物聯合使用時，對H37Rv和10株MTB臨床分離株(敏感、單耐藥、多耐藥、耐多藥以及廣泛耐藥各2株)的MIC，通過計算分級抑菌濃度指數(FICI)，觀察特雷唑來對結核分枝桿菌的體外抑菌作用以及與其他抗結核藥物聯合使用時是否有協同作用。結果94.0%(94/100)的結核分枝桿菌臨床分離株可被≤0.5mg/L的特雷唑來抑制生長，特雷唑來對敏感株、MDR菌株(耐多藥和廣泛耐藥)及非MDR耐藥菌株(單耐藥和多耐藥)的MIC差異無統計學意義(χ2=0.578，P>0．05)。特雷唑來與7種抗結核藥物在體外聯合使用時對結核標準菌株H37Rv和臨床分離株均未表現出相關性。結論特雷唑來對結核分枝桿菌,尤其是耐多藥和廣泛耐藥菌株，均有很好的體外抑菌作用，且與細菌對其他抗結核藥物是否耐藥無關。
結核病是一種嚴重危害人民身體健康的慢性傳染性疾病。世界衛生組織(WHO)新出版的《2015年全球結核病報告》以及《全國第五次結核病流行病學抽樣調查資料匯編》，均強調全球和我國新發肺結核患者以及新發耐多藥結核病患者逐年增加。耐藥結核病尤其耐多藥(MDR-TB)和廣泛耐藥(XDR-TB)結核病已成為全球結核控制工作中的重點和難點。研究耐多藥結核(MDR-TB)和廣泛耐藥結核(XDR-TB)耐藥機制以尋找新的抗耐多藥結核(MDR-TB)和廣泛耐藥結核(XDR-TB)藥物變得刻不容緩。第一代噁唑烷酮類藥物利奈唑胺在我國結核病臨床治療中剛剛起步，第二代噁唑烷酮類藥物特雷唑來(torezolid)對臨床所有的G+,某些G-菌及非典型衣原體顯示出較好的抑菌作用。本研究通過測定第二代噁唑烷酮類藥物特雷唑來對臨床分離的結核分枝桿菌的體外抑菌作用，探討特雷唑來與其他抗結核藥物聯用時的體外相互作用，為臨床合理使用特雷唑來提供實驗室依據。
資料與方法
材料
1菌株來源：結核分枝桿菌菌株：H37Rv標準株(ATCC27294)和100株臨床分離株均為重慶市公共衛生醫療救治中心結核實驗室(2015.01.01-2016.05.30)保留菌株。100株臨床分離株已經結核菌藥物敏感性試驗(比例法)確定的敏感、單耐藥、多耐藥、耐多藥和廣泛耐藥的結核分枝桿菌菌株各20株。
2主要藥物和試劑：特雷唑來(美國MCE上海皓鴻藥物研究有限公司原粉),異煙肼、利福平、鏈霉素、乙胺丁醇、卡那霉素、氧氟沙星、利福布汀均為美國Sigma公司產品。
方法
1微孔板觀察法檢測MIC(mg/L)：特雷唑來0.016-8,異煙肼0.0125-1.6，利福平0.0625-8，鏈霉素0.125-16，乙胺丁醇0.3125-40，卡那霉素0.3125-40，氧氟沙星0.125-16，利福布汀0.03125-4，藥物濃度以二倍稀釋方式由高至低遞減。將標準株H37Rv和100株臨床分離菌株轉種于改良羅氏培養基上，刮取培養2-3周的新鮮菌落，磨菌比濁制成1麥氏單位。再用液體培養基稀釋100倍后，向無菌96孔板各微孔加入200μL菌液。各菌株均設2個不含抗菌藥物對照孔，2個含10%及1%菌液濃度的生長對照孔和2個僅含有液體培養基的空白對照孔。將96孔板于37℃孵育，7 d后每日觀察結果，孔底出現肉眼可見的白色菌體沉淀為生長陽性，無肉眼可見的菌體沉淀為生長陰性。本研究中MIC定義為孔底可見白色菌體沉淀<10%對照孔的最低藥物濃度。空白對照孔出現白色沉淀時，提示檢測板有污染，需重新進行檢測。
2觀察特雷唑來與其他抗結核藥物聯用的體外相互作用：從上述菌株中選取H37Rv和10株臨床分離株，其中包括敏感株、單耐藥菌株、多耐藥菌株、耐多藥菌株、廣泛耐藥菌株各2株，進行藥物相互作用實驗。菌株對上述7種藥物單獨應用的MIC檢測及其與特雷唑來聯合應用的MIC檢測方法同上。聯合用藥中每種抗結核藥的濃度范圍以二倍遞增的方式，選取1/32-8倍MIC的9個濃度。計算分級抑菌濃度指數(fractional inhibitory concentration index，FICI)：FICI=甲藥聯用MIC/甲藥單用MIC+乙藥聯用MIC/乙藥單用MIC，FICI≤0．5為協同作用，0．54為拮抗作用。
特雷唑來與其他抗結核藥物聯用使用對結核分枝桿菌的生長抑制作用——資料與方法
特雷唑來與其他抗結核藥物聯用使用對結核分枝桿菌的生長抑制作用——統計學處理、討論
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