苗藥頭花蓼可抑制幽門螺桿菌(H.pylori)生長
觀察苗藥頭花蓼對幽門螺桿菌(H.pylori)生長代謝及其相關基因的表達的影響。方法:將H.pylori菌接種于不同濃度的頭花蓼培養基(頭花蓼終濃度分別為64、32、16、8、4、2、1及0.5 g/L)，測定無H.pylori菌生長時頭花蓼的最小抑菌濃度(MIC);將H.pylori菌接種于無頭花蓼培養基(對照組)和頭花蓼MIC培養基(頭花蓼組)培養36 h，每隔4 h采用用酶標儀檢測590 nm處的吸光度值，繪制H.pylori生長曲線;用實時熒光定量PCR(Real-Time PCR)檢測2組H.pylori菌液生長代謝相關基因FrdA、FrdB、HyuA及Pfr的表達水平。
結果:頭花蓼對H.pylori最低抑菌濃度MIC為4 g/L，頭花蓼組H.pylori生長曲線位于對照組之下，Real－time PCR結果顯示頭花蓼作用后，頭花蓼組生長代謝相關基因FrdA、FrdB、HyuA及Pfr基因mRNA均呈減弱趨勢，差異具有統計學意義(P＜0.05)。結論:頭花蓼在體外對H.pylori具有明顯抑制作用，可通過影響細菌生長代謝相關基因的表達來抑制H.pylori的生長。
繪制H.pylori生長曲線
取生長于哥倫比亞血瓊脂上的H.pylori菌接種于液體培養基，用液體培養基稀釋至含菌量為1011～1012cfu/L的菌懸液。參照文獻［7］方法，取10個無菌24孔板，每個板設置頭花蓼組及對照組，頭花蓼組依次加入液體培養基、5%H.pylori菌懸液、相應體積的頭花蓼溶液至其終濃度為MIC，對照組加入等體積的5%H.pylori菌懸液，用液體培養基定容至300μL，每個組設置3個重復孔。瞬時離心混勻后置于37℃微需氧培養箱培養36 h。以液體培養基調零，每隔4 h取出一個24孔板用酶標儀測其各個孔在590 nm處的吸光度值。根據3次重復實驗數據求得OD590平均值，繪制H.pylori的生長曲線。
H.pylori生長曲線
頭花蓼組H.pylori生長曲線有明顯變化，細菌在對數期不能進入正常的生長高峰。頭花蓼組的生長曲線位于對照組之下，表明頭花蓼對H.pylori的生長有抑制作用，且主要抑制其對數生長期的細菌分裂。見圖1。
圖1頭花蓼對H.pylori生長的影響
討論
目前H.pylori對抗生素的耐藥性日趨嚴重，探索新的理想的抗H.pylori藥物具有重要的現實意義。頭花蓼是一種傳統苗藥，含有沒食子酸、原兒茶酸乙酯、沒食子酸乙酯等11個化合物，本課題組前期研究發現，頭花蓼具有抗炎抗菌的效果，但其相關機制尚不清楚。本試驗證明，頭花蓼對H.pylori標準株的MIC為4 mg/L，通過與其它抗H.pylori中藥進行比較，H.pylori對頭花蓼的敏感性明顯高于其它中藥(黃芩苷25～200 mg/mL;黃連素12.5 mg/mL)，表明頭花蓼在抗H.pylori方面具有應用研究價值。生長曲線可反映微生物的群體生長規律，通過生長曲線的變化可揭示藥物的抑菌效果，本研究發現，加入頭花蓼后H.pylori生長曲線發生了變化，說明頭花蓼中可能某些成份不利于H.pylori生長。
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