奶牛場(chǎng)明串珠菌的分離鑒定、生長(zhǎng)曲線及產(chǎn)酸曲線、藥敏試驗(yàn)和溶血試驗(yàn)
【目的】從奶牛場(chǎng)環(huán)境和牛體樣本中分離明串珠菌(Leuconostoc)并深入探究其生物學(xué)特性，為防治奶牛乳房炎提供益生菌菌株。
【方法】通過(guò)菌體形態(tài)學(xué)觀察及分子生物學(xué)手段對(duì)分離菌進(jìn)行菌種鑒定，通過(guò)雙層平板法分析菌株對(duì)奶牛乳房炎常見(jiàn)病原菌的抗菌活性，并分析其主要抑菌物質(zhì)成分，建立生長(zhǎng)曲線及產(chǎn)酸曲線，探究其消化道環(huán)境耐受特性，并通過(guò)藥敏試驗(yàn)和溶血試驗(yàn)評(píng)估菌株的安全性。
【結(jié)果】分離得到3株益生菌，在MRS瓊脂培養(yǎng)基上均呈乳白色單菌落，鏡檢為革蘭陽(yáng)性球菌，分別命名為11、14和18號(hào)菌株。16S rDNA測(cè)序結(jié)果顯示，11和14號(hào)菌株與NCBI登錄的腸膜明串珠菌相似性均在99%以上，18號(hào)菌株與乳明串珠菌相似性在99%以上，確定3株分離株均為明串珠菌。
3株明串珠菌對(duì)大腸桿菌和肺炎克雷伯菌的抑菌圈直徑均>19 mm，具有良好的抑菌活性。3株明串珠菌對(duì)大腸桿菌的抑菌物質(zhì)主要包括有機(jī)酸、細(xì)菌素和過(guò)氧化氫;而11、14號(hào)菌株對(duì)肺炎克雷伯菌的主要抗菌物質(zhì)包括有機(jī)酸和過(guò)氧化氫，18號(hào)菌株主要包括有機(jī)酸。
生長(zhǎng)曲線顯示，3株明串珠菌生長(zhǎng)規(guī)律基本一致，其中0~2 h為遲緩期，2~12 h為對(duì)數(shù)期，12 h后為穩(wěn)定期，菌液產(chǎn)酸pH均穩(wěn)定為4.0左右，具有較好的產(chǎn)酸性能。3株明串珠菌在人工胃液、人工腸液中培養(yǎng)4 h后的存活率均在56%以上，膽鹽濃度為0.3%時(shí)，3株明串珠菌存活率均在26%以上，說(shuō)明菌株具有良好的耐受性。藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示，3株明串珠菌對(duì)紅霉素、米諾霉素、妥布霉素等高度敏感;對(duì)青霉素、氨芐西林和萬(wàn)古霉素耐受;對(duì)頭孢呋辛、頭孢曲松、左氧氟沙星等中度敏感。3株明串珠菌均不具有溶血性。
【結(jié)論】本研究分離得到的3株明串珠菌均具有較好的抑菌特性和安全性，為后續(xù)開(kāi)展益生菌防治細(xì)菌性奶牛乳房炎提供了研究基礎(chǔ)。
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