諾卡菌菌株分離、鑒定、抗菌藥物敏感性試驗——摘要、材料與方法
摘要:目的分析諾卡菌病的臨床特點和諾卡菌的耐藥性，為臨床診治提供幫助。方法回顧南陽市中心醫院2018年2月一2023年2月諾卡菌培養陽性的32例患者，分析感染病例的臨床資料，包括一般資料、發病癥狀、基礎疾病、病原菌鑒定、實驗室檢查、胸部CT、臨床診斷、治療與轉歸。采用微量肉湯稀釋法進行諾卡菌體外藥敏試驗。
結果32例諾卡菌培養陽性的患者，8例判為定植，呼吸道定植率為29.17%。感染最常見的菌種是皮疽諾卡菌，其次是蓋爾森基興諾卡菌。24例感染患者，男15例，女9例，年齡17~91歲，平均(59.46±18.59)歲。肺部感染者17例，多數伴有基礎疾病，常見的有慢性阻塞性肺疾病(COPD)(5例)、支氣管擴張(3例)、糖尿病(2例)、肺結核(2例)、艾滋病(1例)，所有患者都表現出咳嗽、咳痰，半數以上伴發熱。胸部CT表現以不同形狀的高密度影最常見，其中斑片影最多(70.6%),58.8%的患者表現為結節影。
皮膚軟組織感染者7例，6例伴有基礎疾病或危險因素，如糖尿病患、腎病綜合征或局部穿刺、傷口污染史。感染患者，C反應蛋白、IL-6和血沉(ESR)升高者均在80%以上，白細胞和中性粒細胞升高者均為50.00%，58.33%的患者伴低蛋白血癥。肺部皮疽諾卡菌感染組血小板(PLT)和纖維蛋白原(FIB)水平均高于非皮疽諾卡菌感染組，差異有統計學意義(P=0.02和P=0.03)。諾卡菌對甲氧芐芐胺嘧嘧啶/磺胺甲惡唑、利奈唑胺和阿米卡星100%敏感，對克拉霉素的耐藥率最高(80.0%)，對多西環素的中介率最高(86.7%)。
皮疽諾卡菌對莫西沙星和阿莫西林/克拉維酸的敏感性均在80%以上。半數以上患者采用基于甲氧芐芐胺嘧嘧啶/磺胺甲惡唑為主的聯合治療方案。治療后，23例(95.83%)患者好轉出院。結論諾卡菌對甲氧芐芐胺嘧嘧啶/磺胺甲惡唑、利奈唑胺和阿米卡星的敏感性最高。諾卡菌肺病臨床癥狀無明顯特異性，胸部CT有助于診斷，及早識別病原菌、根據藥敏結果選用敏感抗菌藥物是有效治療、改善預后的關鍵。PLT和FIB可能參與皮疽諾卡菌引起的肺部炎癥反應。
諾卡菌(Nocardia)是革蘭陽性、需氧、生長緩慢的放線菌，普遍存在于土壤、腐爛的植被和水中。在被有效命名的119種諾卡菌中，有超過40種具有致病潛力，它們主要通過呼吸道或外傷進入人體，在免疫力低下或免疫正常的人群中引起肺部、皮膚、腦甚至全身播散性感染。諾卡菌感染呈逐年增多的趨勢，臨床癥狀多樣化，尤其是肺諾卡菌病易與肺結核、肺結節病甚至肺癌相混淆，易延誤診斷和治療，導致預后不良。諾卡菌病的治療周期長，藥物敏感模式在不同菌種、不同地區和不同時間上存在較大差異，且隨著抗菌藥物的廣泛使用，一些菌株已經對不同抗菌藥物產生了較高的耐藥性，本研究分析諾卡菌感染的臨床特點和耐藥性，旨在為諾卡菌的早期診治、及時治療提供方法和依據。
1材料和方法
1.1病例來源
收集2018年2月一2023年2月我院培養出諾卡菌的住院患者，共32例。諾卡菌感染診斷的細菌學標準:痰標本培養至少2次陽性;在無菌操作條件下取得的肺、皮膚、皮下膿腫的病灶組織或腦脊液，或經支氣管鏡取得支氣管肺泡灌洗液，經普通培養或第二代測序技術檢測、組織病理學等方法證實諾卡菌陽性的患者。播散性諾卡菌感染診斷標準:≥2個不相鄰器官明確有諾卡菌的感染。肺部感染的診斷需符合《中國成人社區獲得性肺炎診斷和治療指
1.2菌株培養和鑒定
諾卡菌的培養在2021年11月前使力平板分離，2021年11月養瓊脂平板(簡稱“自來水平板”)聯合延長培養增加培養陽性率。自來水平板的配制:1.3g瓊脂粉加入100mL自來水中，121℃高壓滅菌30min，冷卻至55℃混勻倒板，測試無菌試驗后使用。菌種鑒定根據鏡下形態(革蘭染色和弱抗酸染色)、菌落形態以及質譜鑒定進行初步鑒定，用16S rRNA、secAl基因擴增測序進行最終鑒定。收集臨床資料，包括姓名、性別、年齡、職業、科室、發病癥狀、基礎疾病、實驗室檢查(包括血常規、C反應蛋白、紅細胞沉降率、降鈣素原等)、胸部CT、診斷、治療方案及預后和轉歸。
1.3儀器與試劑
血平板、巧克力平板、Autofmc1000基質輔助激光解析電離飛行時間質譜儀均來自鄭州安圖生物工程股份有限公司;二氧化碳培養箱(型號Galaxyl70R)來自Eppendorf公司;瓊脂粉購于天津致遠化學試劑有限公司，oCelloScope微生物快速藥敏監測系統來自丹麥BioSense公司。質控菌株金黃色葡萄球菌ATCC 29213、大腸埃希菌ATCC35218(僅用于阿莫西林/克拉維酸)來自國家衛生健康委員會。
1.4抗菌藥物敏感性試驗
用微量肉湯稀釋法測定諾卡菌分離株對常用抗菌藥物的最小抑制濃度(minimum inhibitory concentration,MIC)，包括阿米卡星、阿莫西林/克拉維酸、頭孢吡肟肟、頭孢曲松、環丙沙星、克拉霉素、多西環素、亞胺培南、利奈唑胺、米諾環素、莫西沙星、妥布霉素、甲氧芐芐啶/磺胺甲惡唑(SXT)等。具體試驗方法和藥敏折點判斷標準參照美國臨床和實驗室標準協會CLSI M24 2rd ed和CLSI M62 2018文件。
1.5統計學分析
采用SPSS19.0進行統計學分析，符合正態分布的計量資料用均值±標準差(x±s)表示，兩組間采用獨立樣本t檢驗。不符合正態分布的計量資料用中位數(四分位數)[M(P25，P75)]表示。