鯽魚戴氏西地西菌生長曲線繪制及藥敏試驗結果（一）
摘要：本試驗旨在從患病鯽魚的鰓、腎、肝、胰臟等病灶部位分離病原菌，并對其進行鑒定。采用革蘭染色的方法觀察其為短桿狀、呈單雙排列的革蘭陰性菌，利用丹麥Biosense生產的全自動微生物生長分析儀進行生化鑒定及藥敏試驗分析，結果為戴氏西地西菌，對亞胺培南、美洛培南、左氧氟沙星和環丙沙星等高度敏感；對氨曲南和頭孢唑啉耐藥性最強。并繪制了此菌的生長曲線，發現2～6 h進入對數期，對數期時間較早，22 h后就進入了穩定期。后進行回歸試驗發現死亡率為66.7%，危害較大。因魚類中發現戴氏西地西菌較少，所以本文對于魚類戴氏西地西菌的研究有重要意義。
戴氏西地西菌屬西地西菌屬，還包括奈氏西地西菌和拉氏西地西菌。戴氏西地西菌為革蘭陰性桿菌，大小為0.5～0.6μm×1～2μm，大多數菌株能運動，兼性厭氧。是一種條件致病菌，被從人類的尿液、膽汁、痰和血液中檢出，但是魚類中很少發現[1-3]。2011年熊祝嘉等[4]從患者尿液中檢測出戴氏西地西菌一例，可導致泌尿系感染，而造成間斷躁動6年，加重伴喘憋，呼吸困難等現象。Sevki Kayis等對土耳其-黑海區南方學院的虹鱒魚細菌進行調查，春天和夏天都各分離出了
1株戴氏西地西菌，其存在部位有腎臟、脾臟和肝、胰臟，這也證實了魚里面有戴氏西地西菌。本試驗從患病鯽魚中分離到1株戴氏西地西菌，進行藥敏試驗，篩選了防治藥物，為預防和治療戴氏西地西菌引起的鯽魚類疾病提供了一定的參考依據。
1、材料與方法
1.1材料
試驗魚，購自吉林省某漁場，鯽魚出現鰓出血，胸鰭和腹鰭基部及生殖口均出現充血，魚身出現不同的出血點及潰爛。剖檢死魚，發現鰓部發紅且有的鰓絲發白，腸道、肝胰臟、脾臟等處均出現充血癥狀。
1.2試驗儀器及試劑
150G全溫振蕩培養箱、立式壓力蒸汽滅菌器、電熱恒溫鼓風干燥箱、超凈工作臺、722N可見分光光度計、革蘭染色試劑盒、丹麥Biosense自動細菌鑒定/藥敏檢測系統、4℃冰箱、微量移液器、試管、直徑90 mm平皿、醫用1 mL注射器、麥康凱瓊脂培養基、LB培養基、生理鹽水。
1.3方法
1.3.1病原菌的分離
無菌的超凈工作臺剖檢患病鯽魚，取其鰓、肝、胰臟和腎臟等病灶部位，制成勻漿。將勻漿稀釋成不同濃度，微量移液器取200μL勻漿涂布到麥康凱瓊脂平板上，30℃培養24 h后觀察菌落生長狀態。挑取優勢菌群劃線純培養，待菌落形態生長一致，挑取單菌落用80%甘油進行保藏。
1.3.2病原菌的鑒定
1.3.2.1革蘭染色法
無菌條件下潔凈的載玻片滴少許生理鹽水，用接菌環將分離純化后的菌株均勻的涂布到載玻片上，干燥固定，后用結晶紫染液初染、碘液媒染、酒精脫色、番紅染液復染后鏡檢。
1.3.2.2生化鑒定
用丹麥Biosense微生物生長動態監測系統儀器進行鑒定，鑒定板為革蘭陰性菌鑒定板，96孔，試驗周期15 h結束后觀察結果并分析。