不同pH、培養(yǎng)時間對乳酸菌富集鈣的影響
本文對七種乳酸菌的生長能力、產(chǎn)酸能力、富集鈣能力進行了測定，篩選出鈣富集量最高的是植物乳桿菌CY1-1，富集量為45.41 mg/g；其次為植物乳桿菌Z7，富集量為37.9 mg/g。將以上兩種菌株與其他乳酸菌菌株復(fù)合，結(jié)果表明植物乳桿菌Z7+清酒乳桿菌YP4-5復(fù)合菌株，植物乳桿菌CY1-1+嗜酸乳桿菌DL12復(fù)合菌株在鈣富集量和乳酸含量上均有提升。
乳酸菌的生長曲線
圖1為七種乳酸菌的生長曲線。由圖可以看出，七種乳酸菌的生長趨勢大致相同，均呈先上升后平緩的趨勢。在對數(shù)生長期（4～12 h）生長情況較好的是嗜酸乳桿菌，干酪乳桿菌的生長情況滯后于其余乳酸菌。進入穩(wěn)定期后各乳酸菌的差異逐漸縮小，此階段生長情況最好的是植物乳桿菌CY1-1，這可能是由于植物乳桿菌具有廣泛性、普遍性，生長穩(wěn)定，干酪乳桿菌生長情況較其余菌株差。
培養(yǎng)時間對乳酸菌富集鈣的影響
為了研究時間對乳酸菌富集鈣的影響，將四組實驗菌株（CY1-1、CY1-1+DL12、Z7、Z7+P4-5）接種于含Ca2+含量為1.2 mg/mL的MRS培養(yǎng)基中，37℃恒溫培養(yǎng)24 h，每隔2 h進行取樣測定生長曲線。根據(jù)生長曲線，各組乳酸菌在4～10 h生長迅速，在14～24 h生長趨勢基本平緩，故選取8和22 h為時間點進行實驗，研究對數(shù)期、穩(wěn)定期的菌株富集鈣的差異。將乳酸菌培養(yǎng)8和22 h，收集并洗滌菌體，將菌體重懸于氯化鈣溶液中進行鈣富集實驗，可以看出對數(shù)期的菌株富集鈣含量要低于穩(wěn)定期。對數(shù)期鈣富集量約占穩(wěn)定期的80%～90%，這可能是在細(xì)胞增殖過程中，鈣與細(xì)胞器結(jié)合，蛋白質(zhì)和多糖等物質(zhì)含有的氨基、羧基、羥基等基團，能與金屬離子發(fā)生相互作用，而在穩(wěn)定期乳酸菌生長穩(wěn)定、生物累積量較大，鈣離子通過載體進入細(xì)胞或與特定物質(zhì)結(jié)合，從而完成鈣的富集作用，因此鈣富集量要高于對數(shù)期。
培養(yǎng)溫度對乳酸菌富集鈣的影響
乳酸菌最適發(fā)酵產(chǎn)酸溫度是40～42℃，而最適生長溫度是35～37℃。實驗選擇35、37、40、42℃培養(yǎng)實驗菌株，在鈣離子含量為1.2 mg/mL中的氯化鈣溶液中進行富集，比較富集鈣效果。溫度對于各組間鈣富集量的影響具有一定差異，四組乳酸菌總體趨勢為隨著溫度升高鈣富集量呈先上升后下降趨勢。其中Z7+YP4-5組的最適溫度為37℃，其余三組的最適溫度為40℃。Mrv?ic等研究溫度對于乳酸菌富集鋅的影響，結(jié)果顯示乳酸菌富集鋅的能力隨著溫度的升高而提高，原因可能是溫度影響了菌體的活性或乳酸菌與金屬結(jié)合物的穩(wěn)定性。
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