不同氨基氮含量的培養(yǎng)基對鼠疫菌生長的影響
目的探討不同氨基氮含量對鼠疫菌生長的影響觀察。方法同批次消化液不同含量(120mg/L、150mg/L、170mg/L、200mg/L、250mg/L、300mg/L)氨基氮作為基礎消化液制備的赫氏瓊脂培養(yǎng)基(指100mL培養(yǎng)基內(nèi)所含的氨基氮)進行活菌數(shù)實驗，尋找出適宜鼠疫菌生長的最佳氨基氮。結(jié)果通過反復實驗發(fā)現(xiàn)6種不同氨基氮含量對鼠疫菌生長影響中170mg/L含量的赫氏培養(yǎng)基優(yōu)于其它5種氨基氮含量培養(yǎng)基，經(jīng)統(tǒng)計學分析有差異(P<0.05)。結(jié)論鼠疫菌生長的最佳氨基氮含量為170mg/L。
細菌在生長發(fā)育過程中需要一定的營養(yǎng)，最主要的是氨基酸、糖和金屬離子，國內(nèi)鼠疫實驗室常用的基礎培養(yǎng)基有肉浸液瓊脂，其中以胰酶消化液為優(yōu)。本所制備的基礎培養(yǎng)基為赫氏消化液，可用于鼠疫菌分離、純化、判定等，其氨基氮含量在700～1000m g/L，按每100m L培養(yǎng)基內(nèi)含75m g氨基氮的比例，鼠疫菌生長良好，但氨基氮含量多少才是鼠疫菌最適生長的溫床，國內(nèi)外未曾報道，為此，本試驗通過6種不同氨基氮含量的培養(yǎng)基，篩選鼠疫菌生長的最佳氨基氮。
1材料與方法
1.1材料
1.1.1試劑氯化鈉，天津市化學試劑批發(fā)公司;磷酸氫二鈉，天津市凱通化學試劑有限公司;瓊脂粉，北京欣經(jīng)科生物技術(shù)有限公司;蛋白胨(英國進口);赫氏消化液，由青海省地方病預防控制所制備。1.1.2菌株EV76巴黎株，鼠疫強毒標準141株，由鼠疫菌專業(yè)實驗室提供。
1.2方法
1.2.1赫金格爾消化液制備
量取自來水5 000m L置白瓷桶內(nèi)，加入絞碎去脂腱的牦牛肉，煮沸30min并隨時攪拌。待冷卻至56℃時加入豬胰臟250g，無水碳酸鈉70g，測其p H值為7.8，加入三氯甲烷80～100mL，冷卻以橡皮塞緊塞瓶口，置于37℃溫箱內(nèi)消化7～9d，每日振蕩3～4次，消化良好時，上清液黃色透明，殘渣沉于瓶底且甚少，氨基氮500～800mg/L或更高。
1.2.2氨基氮含量測定
根據(jù)每毫升N/10氫氧化鈉滴定1.4毫克氨基氮的公式來計算，所得的數(shù)字乘以100即為每100m L培養(yǎng)基內(nèi)所含氨基氮的毫克數(shù)。本次試驗所用氨基氮含量在820m g/L在所需范圍之內(nèi)。
1.2.3赫金格爾培養(yǎng)基制備
選取6種氨基氮含量即120mg/L、150mg/L、170mg/L、200mg/L、250mg/L、300mg/L(指每100m L中所含的氨基氮消化液)，稱取氯化鈉0.3%、磷酸氫二鈉0.1%、瓊脂粉2%、蛋白胨1%，按6種不同氨基氮量加入相應消化液和蒸餾水(每種總量分別為1000mL，8磅15m in，測p H7.0，15磅30m in高壓滅菌，加10%脫纖維兔溶血10m L，混勻，傾注平皿，放入37℃溫箱24h無菌生長方可使用)。
1.2.4活菌數(shù)測定
取EV76和鼠疫強毒標準株141 28℃24h斜面培養(yǎng)物按常規(guī)稀釋法稀釋，用生理鹽水比濁成7億/m L，使鼠疫菌懸液最終濃度為1000個菌/m L，取制備好的6種不同氨基氮含量培養(yǎng)基平皿各10個，分成兩組，一組為EV76的菌懸液，一組為鼠疫強毒菌141菌懸液，每組各為5個平皿，分別接種菌懸液0.1m L，用L棒涂抹均勻，28℃48h培養(yǎng)后計算菌落數(shù)，經(jīng)檢查(檢測)批數(shù)12批，每批各5個平皿，每種氨基氮含量的培養(yǎng)基平皿數(shù)為60個。
2結(jié)果
2.1赫氏培養(yǎng)基不同氨基氮含量對EV76生長影響
觀察表1顯示170mg/L的赫氏培養(yǎng)基與120m g/L、150m g/L、200mg/L、250mg/L、300mg/L對鼠疫菌生長的影響，經(jīng)統(tǒng)計學分析(t檢驗)有差異(P<0.05)。
2.2赫氏培養(yǎng)基不同氨基氮含量對鼠疫菌141生長影響
觀察表2顯示，170mg/L的赫氏培養(yǎng)基與120mg/L、150mg/L、200mg/L、250mg/L、300mg/L對鼠疫菌生長的影響，經(jīng)統(tǒng)計學分析(t檢驗)有差異(P<0.05)。
表1不同氨基氮含量對EV76 Paris株生長影響的觀察
表2赫氏培養(yǎng)基不同氨基氮含量對強毒菌141生長影響的觀察
3討論
鼠疫的判定是以分離鼠疫菌為依據(jù)的，培養(yǎng)基是分離鼠疫菌的基本條件之一，在鼠疫病原檢驗中發(fā)揮著重要作用，其成分和質(zhì)量直接影響鼠疫菌的生長、繁殖和分離。國內(nèi)實驗室常用的基礎培養(yǎng)基有肉浸液瓊脂，其中以胰酶消化液為優(yōu)。細菌在生長過程中需要一定的營養(yǎng)，最主要的是氨基酸、糖和金屬離子。所以消化液氨基氮含量的高低直接影響培養(yǎng)基的質(zhì)量，每批消化液氨基氮范圍需達到500～800mg/L或更高，即每100mL培養(yǎng)基內(nèi)含75mg氨基氮的比例，但究其鼠疫菌生長的最佳氨基氮，目前國內(nèi)外還未曾報到，我們選取了6種劑量組的不同氨基氮即120mg/L、150mg/L、170mg/L、200mg/L、250mg/L、300mg/L進行了反復試驗，經(jīng)統(tǒng)計學分析(t檢驗)有差異(P<0.05)，表明170mg/L的消化液鼠疫菌生長優(yōu)于其它5種氨基氮。由此得出結(jié)論鼠疫菌生長的氨基氮需有一定的范圍，含量過高或過低都會影響其生長。這就消除了以前誤認為只要氨基氮含量越高其鼠疫菌生長就越好的誤區(qū)，因此，只有尋找適宜的氨基氮含量才是鼠疫菌生長的最有利條件。通過該實驗篩選出170mg/L是鼠疫菌生長的最適氨基氮。
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