短梗霉素A對植物病原真菌灰葡萄孢菌AUR 1基因的抑制生長機理（二）
2、結果與分析
2.1 AbA敏感性測定
結果表明，野生株Bc AUR1在2μg/m L Ab A的培養基上能夠生長;Ab A為8μg/m L時，生長受到嚴重抑制;當Ab A濃度達到50μg/m L時，未見菌體生長(圖2)。突變株Bc AUR1a在Ab A濃度為2～50μg/m L的培養基上均能生長(圖2)，表明突變菌株Bc AUR1a對Ab A產生了抗性。
圖2灰葡萄孢菌對AbA敏感性測定
2.2突變株Bc AUR1a對Ab A處理柑橘的侵染
2.5%甲醇處理的對照組柑橘全部被野生株Bc AUR1感染(圖3a)，50μg/m L Ab A處理的試驗組柑橘均未被野生株Bc AUR1感染(圖3b)，說明Ab A抑制了野生株Bc AUR1對柑橘的侵染，能夠有效防治柑橘灰霉病的發生。而突變株Bc AUR1a則對試驗組和對照組柑橘都能侵染(圖3c～d)，說明Ab A不能抑制突變株BCAUR1a對柑橘的侵染，突變株Bc AUR1a產生了Ab A抗性。
圖3 AbA對灰葡萄孢菌侵染柑橘的影響
2.3 Ab A對灰葡萄孢細胞形態的影響
未經Ab A處理的灰葡萄孢Bc AUR1細胞壁較厚，細胞壁表面界限和表面物質清晰可見;細胞質膜平滑連續，緊貼細胞壁;內膜系統豐富，線粒體膜完整，嵴豐富而粗壯，液泡膜完整，細胞質中富含糖原顆粒(圖4a～b)。在8μg/m L的Ab A作用下，細胞明顯變小，細胞壁變薄，細胞壁和細胞質膜表面粗糙不平，皺縮明顯，部分質膜和液泡膜破裂;內膜系統的部分膜界限不清晰，線粒體腫脹，糖原顆粒和細胞內容物顯著減少(圖4c～f)。表明Ab A抑制了IPC合成酶的活性，導致鞘脂類合成代謝受阻，細胞膜結構受到嚴重影響，質膜和內膜系統形態異常，發生褶皺甚至破裂，造成細胞內糖原和內容物泄漏。
圖4灰葡萄孢菌細胞形態的透射電鏡
3、討論
Ab A能抑制多種真菌的生長，對假絲酵母(Candida)、曲霉(Aspergillus)、釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)等病原真菌均有抑制作用。我們通過Ab A對灰葡萄孢菌野生株BcAUR1及其AUR1基因但內含子缺失的突變株Bc AUR1a抑制作用的研究，也證實低濃度Ab A(8μg/m L)能夠顯著抑制灰葡萄孢菌野生株Bc AUR1的生長，高濃度Ab A(50μg/mL)則完全抑制其生長，但突變株Bc AUR1a則不受Ab A的影響，在高濃度Ab A存在下亦能正常生長。灰葡萄孢菌感染柑橘的試驗也證實了這一結果。這些結果均表明Ab A通過抑制IPC合成酶的活性，導致鞘脂合成不足，從而抑制了灰葡萄孢菌的生長。試驗中突變株BcAUR1a是AUR1基因中缺失內含子，產生了AbA抗性，抵抗Ab A對灰葡萄孢菌生長的抑制，說明該內含子可能在AUR1基因表達調控中發揮重要的作用，目前已有許多研究表明內含子具有調控基因轉錄的功能，在其序列中發現了轉錄調控元件，起著啟動子、增強子和抑制子的作用。
鞘磷脂是細胞膜的重要組成成分，特別是生物膜脂筏(lipid raft)結構中的主要物質，鞘磷脂還與細胞信號轉導、胞吞、胞飲等密切相關。本研究發現，Ab A導致灰葡萄孢細胞質膜和內膜系統形態異常，質膜和液泡膜斷裂，導致細胞內物質泄露，從而抑制了細胞生長。進一步證實了Ab A使神經酰胺和磷脂酰肌醇生成肌醇磷脂酰神經酰胺的反應受阻，導致鞘磷脂類物質的合成量不足，細胞膜結構遭到破壞，造成糖原等細胞內物質泄露。
綜上所述，Ab A抑制絲狀真菌生長的機理是抑制了IPC合成酶的活性，導致鞘磷脂類物質的合成不足，細胞膜結構遭到破壞，細胞內物質外漏。
短梗霉素A對植物病原真菌灰葡萄孢菌AUR 1基因的抑制生長機理（一）
短梗霉素A對植物病原真菌灰葡萄孢菌AUR 1基因的抑制生長機理（二）