25種天然植物精油對藍莓致病菌生長曲線、抑制作用（四）
3討論與結論
藍莓果實脆嫩多汁、營養豐富，采后易遭受病原菌侵染而大量腐爛。為降低藍莓采后的經濟損失，通過分離、鑒定引起藍莓腐爛的優勢病原菌并對其進行控制。形態學和分子測序是鑒定病原菌種類的常用方法，依據4種菌株在PDA上生長的菌落特征、顯微鏡下的分生孢子梗和分生孢子的形態特征對其進行初步鑒定，初步判定病原菌I、II、III和IV分別為青霉（Penicillium spp.）、曲霉（Aspergillus spp.）、鏈格孢霉（Alternaria Nees）和鐮刀菌（Fusarium spp.）。致病性分析發現4種菌的致病力排序為I＞II＞III＞IV。形態學鑒定不能很好地區分同屬的病原菌種類，而保守基因測序可進一步將病原菌區分。?ebeljan等通過ITS、BenA、CaM和RPB2基因鑒定出了梨果中的致病菌為皮落青霉；Zhang Yusen、Choi和張婷等根據ITS、BenA、CaM測序差異對土壤以及稻谷中的曲霉分離株進行了新分類物種鑒定，并且從稻谷中分離鑒定出了塔賓曲霉。
Gannibal和Fulcher等驗證了鏈格孢菌在目前的分子技術中物種界定并不明確，統稱為鏈格孢菌。在本研究中，根據形態學特征和3種基因（ITS、BenA和CaM）的測序，分離獲得的4種致病菌分別為皮落青霉、塔賓曲霉、鏈格孢菌和串珠鐮刀菌。羅冬蘭等在貴州粉藍藍莓中分離到了鏈格孢菌、灰葡萄孢菌以及膠孢炭疽等，且主要致腐菌為膠孢炭疽。劉春燕等在四川藍莓中分離鑒定出了黑曲霉、青霉、噬木枝狀枝孢菌、類擬盤多毛孢菌和鏈格孢菌5種優勢致病菌。周倩等在遼寧藍莓中分離鑒定出了青霉、產黃青霉和鏈格孢菌3種優勢致病菌。由此看出，不同地區藍莓上的優勢病原菌略有差異，可能是因為各地區氣候、地質以及藍莓品種不同導致。為了更好地了解優勢病原菌的生長特性，測定了它們的生長最適溫度、生長曲線以及孢子萌發情況，發現病原菌皮落青霉和鏈格孢菌對低溫的耐受性較好，在4℃條件下仍能生長，它們的最適生長溫度為25℃左右，與Camardo和范文忠等測定的最適生長溫度結果一致。
塔賓曲霉對低溫耐受性較差，但對高溫耐受性較好，最適溫度在28℃左右，與陳江研究的塔賓曲霉生長狀態一致。因此，針對皮落青霉和塔賓曲霉引起的藍莓病害，采取低溫保鮮的效果可能較差，建議低溫結合藥物抑菌處理；而塔賓曲霉的防控可采取低溫貯藏防控，溫度較高會加速病害的發生。3種菌的快速生長期均在2～3 d，孢子在培養12 h均能完全萌發。因此，果實在采摘后應盡早進行抑菌處理控制病原菌的生長進程。
植物精油具有易揮發、純天然、廣譜性抑菌以及低毒或無毒的天然優勢，被廣泛用于采后果蔬的防腐保鮮。Ceylan等通過測定番茄果實的品質以及營養物質含量，發現一定劑量的鼠尾草精油能夠有效保持“Sentino F1”番茄冷藏期間的果實品質。王軼楠探究了山蒼子精油對辣椒疫霉病的防治效果，2 mg/mL山蒼子精油對辣椒疫霉的相對防治效果達到了68%。本實驗探究了包括丁香羅勒精油、茉莉精油、山蒼子精油和快樂鼠尾草精油等25種天然植物精油對藍莓致病菌的作用效果，發現茉莉精油、丁香羅勒精油、續斷精油、山蒼子精油和紅景天精油在體外對藍莓果實4種致病菌的生長具有高效的抑制作用，且其作用濃度均不高于2μL/mL。Rath等發現茉莉精油在31.25μL/mL時才能完全抑制大腸桿菌的生長，與本研究結果不同。有研究表明，10μL丁香羅勒精油在48 h時的抑菌圈直徑大于40 mm，對青霉、鏈格孢菌、灰霉以及根霉均具有較強的抑制作用。續斷精油對黃曲霉有較好的抑制效果，在800 mg/L時對黃曲霉菌的抑菌率為10.96%。紅景天精油高于0.625μL/mL對黑曲霉具有較好抑制作用。
進一步檢測茉莉精油、丁香羅勒精油、續斷精油、山蒼子精油和紅景天精油對皮落青霉、塔賓曲霉、鏈格孢菌和病原菌IV的抑菌MIC和MFC，發現山蒼子精油和丁香羅勒精油的作用效果最佳，MIC和MFC更小，基本上低于1μL/mL。類似地，孫暢、黃曉霞和Li Yanjun等發現山蒼子精油對意大利青霉菌和黃曲霉的MIC分別為1.17、0.80μL/mL，對黃曲霉的MFC為1.50μL/mL，能有效抑制柑橘病斑直徑的擴散。丁香羅勒精油對香蕉炭疽的MIC和MFC分別為275μL/L和600μL/L。這些結果表明，茉莉精油、丁香羅勒精油、續斷精油、山蒼子精油和紅景天精油具有廣譜的抑菌作用，但其作用濃度在不同物種病原菌上存在差異。
因此，進一步探究了這5種精油在控制藍莓病害發生中的作用，與5種精油體外高效的抑菌作用不同，蒼子精油熏蒸處理對藍莓果實的青霉病具有最佳的控制效果，在貯藏第6天時果實發病率僅為15%，其次為茉莉精油處理（發病率比對照組低27.5%），續斷精油和紅景天精油僅對藍莓青霉病具有微弱的控制效果（與對照無顯著差異），而丁香羅勒精油完全沒有表現出病害控制效果。體內和體外實驗作用效果的差異可能受多種因素的影響，如處理方式、使用濃度、精油的穩定性和穿透性等的影響。在活體實驗中，熏蒸方式可能會影響精油的分布和接觸病原菌的機會，從而影響抑菌效果。
另外，本實驗僅使用MFC進行活體實驗，該濃度可能不是丁香羅勒精油、茉莉精油、續斷精油和紅景天精油的最佳作用濃度。此外，丁香羅勒精油、續斷精油和紅景天精油在體外實驗中表現出較高的抑菌活性，但在體內實驗中，精油的穩定性和穿透性可能會受到果實表皮等生物屏障的影響，從而影響其抑菌效果。因此，精油在應用過程中應綜合考慮各種影響因素。盡管如此，本研究證實山蒼子精油和茉莉精油處理對藍莓致病菌具有較好的控制體外和體內控制作用，可用于控制采后藍莓腐爛損失。