不同濃度巴西蘇木素對(duì)耐碳青霉烯類鮑曼不動(dòng)桿菌生長(zhǎng)及抑制作用（三）
2結(jié)果
2.1菌株藥敏檢測(cè)結(jié)果
藥敏檢測(cè)結(jié)果顯示，10株CRABA對(duì)哌拉西林、頭孢他啶、頭孢噻肟、頭孢吡肟、氨芐西林/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、亞胺培南、慶大霉素、阿米卡星、環(huán)丙沙星、左氧氟沙星、四環(huán)素耐藥率為100%，對(duì)多黏菌素耐藥率為0。
2.2 MIC、MBC測(cè)定結(jié)果
蘇木萃取液對(duì)10株CRABA的MIC均為15.63 mg/mL，MBC均為15.63 mg/mL。巴西蘇木素對(duì)10株CRABA的MIC均為0.500 0 mg/mL，MBC均為0.500 0 mg/mL。原蘇木素B對(duì)10株CRABA的MIC均無(wú)效。
2.3蘇木組分高效液相圖譜
DMSO的高效液相圖譜見(jiàn)圖1，蘇木萃取液的高效液相圖譜見(jiàn)圖2，巴西蘇木素的高效液相圖譜見(jiàn)圖3，說(shuō)明蘇木萃取液中產(chǎn)生抑菌作用的組分為巴西蘇木素。
2.4巴西蘇木素對(duì)CRABA生長(zhǎng)的影響
巴西蘇木素藥物濃度越大，其對(duì)CRABA的抑制生長(zhǎng)作用越強(qiáng)，見(jiàn)圖4。
圖4巴西蘇木素對(duì)CRABA生長(zhǎng)的影響
2.5 SDS-PAGE圖譜
隨著巴西蘇木素濃度的增大，其對(duì)CRABA的分泌蛋白抑制作用越強(qiáng)，見(jiàn)圖5。
2.6巴西蘇木素與美羅培南聯(lián)合用藥細(xì)菌生長(zhǎng)抑制結(jié)果
美羅培南對(duì)CRABA的MIC為0.128 mg/mL，F(xiàn)IC指數(shù)為0.75，為相加作用，見(jiàn)表2、3。
3討論
近年來(lái)隨著碳青霉烯類藥物的廣泛使用，耐碳青霉烯類革蘭陰性菌感染日益突出，其中CRABA所致感染的發(fā)生率和死亡率均較高，治療難度較大。CRABA對(duì)多粘菌素B的敏感性最高，耐藥率為1.4%，但因其腎臟和神經(jīng)毒性作用，臨床甚少使用。CRABA對(duì)頭孢哌酮-舒巴坦、米諾環(huán)素、左氧氟沙星和阿米卡星的耐藥率分別為33.0%、42.2%、45.5%和40.2%。對(duì)頭孢他啶、亞胺培南、美羅培南和環(huán)丙沙星等耐藥率均在50%以上。目前針對(duì)CRABA感染的治療手段非常有限，主要是頭孢哌酮-舒巴坦、喹諾酮類和氨基糖苷類藥物。因此，針對(duì)CRABA探索新型藥物已成為研究的熱點(diǎn)。
蘇木的主要活性成分為生物堿，研究表明其中的巴西蘇木素在抗菌中起主要作用。LANE等發(fā)現(xiàn)巴西蘇木素對(duì)耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑為14.85 mm，MIC為12.5μg/mL。SYAMSUNARNO等發(fā)現(xiàn)蘇木中的巴西蘇木素對(duì)耐甲氧西林金黃色葡萄球菌、耐萬(wàn)古霉素腸球菌及其他菌種具有很強(qiáng)的抑制作用，MIC為4～32μg/mL。因此，本研究探討了蘇木活性成分對(duì)CRABA的體外抑菌作用，為中藥抑菌研究提供理論支持。
既往研究發(fā)現(xiàn)，大部分抑菌的中藥對(duì)細(xì)菌的生長(zhǎng)和蛋白譜的表達(dá)均有影響，本試驗(yàn)也獲得了相似的結(jié)果。在不同濃度巴西蘇木素作用下，CRABA的生長(zhǎng)受到明顯抑制，細(xì)菌可溶性蛋白表達(dá)發(fā)生了明顯變化，說(shuō)明巴西蘇木素對(duì)CRABA的抑菌作用可能與其影響細(xì)菌生長(zhǎng)、蛋白質(zhì)的表達(dá)有關(guān)，其機(jī)制還需要進(jìn)一步研究。
目前中藥很少系統(tǒng)地被應(yīng)用于臨床，其主要原因在于中藥對(duì)細(xì)菌的抑制作用弱于常用抗菌藥物。然而有研究表明，某些中藥與抗菌藥物聯(lián)用可以產(chǎn)生明顯的增效作用，因此，中藥與抗菌藥物聯(lián)用成為新的研究思路。本研究創(chuàng)新性地將巴西蘇木素和美羅培南進(jìn)行聯(lián)合用藥試驗(yàn)以觀測(cè)對(duì)CRABA的抑制作用，發(fā)現(xiàn)二者聯(lián)合用藥與單藥比較，抑菌效果得到了明顯增強(qiáng)。本研究雖然證實(shí)巴西蘇木素與美羅培南對(duì)CRABA有相加效應(yīng)，但從體外抑菌試驗(yàn)結(jié)果分析，巴西蘇木素與美羅培南聯(lián)合用藥要達(dá)到完全抑菌效果，巴西蘇木素藥物濃度較低時(shí)，美羅培南仍需較高濃度，如何使二者聯(lián)用發(fā)揮更好的抑菌作用，尚需進(jìn)一步研究。
綜上所述，中藥抗菌具有較好的前景，貫穿于抗菌的各個(gè)環(huán)節(jié)。一方面，中藥可以直接作用于微生物本身，破壞細(xì)菌細(xì)胞壁和細(xì)胞膜的完整性改變細(xì)胞通透性、抑制細(xì)菌生物被膜的形成。另一方面，通過(guò)逆轉(zhuǎn)細(xì)菌耐藥性，促進(jìn)其他藥物的殺菌作用，如抑制耐藥菌外排泵、消除耐藥質(zhì)粒R。本研究不足之處在于：(1)所采用菌株數(shù)量較少，且其藥敏檢測(cè)結(jié)果相同，故10株菌所得到的結(jié)果也完全相同，雖然表明研究的重復(fù)性較好，但所得結(jié)果不能證明巴西蘇木素對(duì)耐藥性不同的CRABA都有很好的抗菌作用，其結(jié)果存在一定的偏倚，為臨床提供的幫助存在局限性。(2)未對(duì)其他抑菌機(jī)制展開(kāi)研究，且僅處于體外試驗(yàn)階段，不能有效評(píng)價(jià)巴西蘇木素在體內(nèi)的療效。因此，未來(lái)將進(jìn)一步展開(kāi)試驗(yàn)以探討巴西蘇木素抑菌作用的機(jī)制，為體外試驗(yàn)、臨床試驗(yàn)及應(yīng)用提供理論依據(jù)，使巴西蘇木素的抑菌活性得到真正發(fā)揮。
不同濃度巴西蘇木素對(duì)耐碳青霉烯類鮑曼不動(dòng)桿菌生長(zhǎng)及抑制作用（一）
不同濃度巴西蘇木素對(duì)耐碳青霉烯類鮑曼不動(dòng)桿菌生長(zhǎng)及抑制作用（二）
不同濃度巴西蘇木素對(duì)耐碳青霉烯類鮑曼不動(dòng)桿菌生長(zhǎng)及抑制作用（三）
丹麥Biosense微生物生長(zhǎng)動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)系統(tǒng)oCelloScope是一款直接法測(cè)生長(zhǎng)曲線的儀器。oCelloScope主要應(yīng)用：
1、抗菌藥敏試驗(yàn)（AST）/MIC測(cè)定：通過(guò)實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)成像，可以動(dòng)態(tài)、實(shí)時(shí)地觀察、拍照、攝像不同類型的致病菌的動(dòng)態(tài)生長(zhǎng)和測(cè)量生長(zhǎng)曲線，并能同時(shí)計(jì)數(shù)微生物的菌落數(shù)。
2、自動(dòng)監(jiān)測(cè)真菌的生長(zhǎng)和萌發(fā)過(guò)程：多孔微孔板（96孔）中實(shí)時(shí)記錄圖像來(lái)實(shí)現(xiàn)評(píng)估青霉菌（真菌）的生長(zhǎng)和形態(tài)變化，給出真菌的動(dòng)態(tài)生長(zhǎng)和測(cè)量生長(zhǎng)曲線。
3、監(jiān)測(cè)孢子萌發(fā)：可自動(dòng)監(jiān)測(cè)孢子的萌發(fā)及孢子發(fā)芽過(guò)程。
4、追蹤微生物細(xì)胞形態(tài)變化：能夠分析和跟蹤細(xì)胞形態(tài)的變化，系統(tǒng)包含一種基于細(xì)菌平均長(zhǎng)度分割提取的桿狀細(xì)菌成絲監(jiān)測(cè)算法。
5、研究生物膜的非靜態(tài)動(dòng)力學(xué)和形態(tài)學(xué)：用于研究真菌、細(xì)菌和生物膜的非靜態(tài)動(dòng)力學(xué)和形態(tài)學(xué)。
6、食品防霉防腐的優(yōu)化研究： 篩選出對(duì)各種食品敗霉菌的抗菌劑及對(duì)乳酸菌產(chǎn)生的化合物對(duì)真菌的抗真菌活性篩選。
7、新藥研發(fā)：開(kāi)發(fā)新藥或研究如何使用多種藥物組合來(lái)抑制真菌和細(xì)菌的生長(zhǎng)。
8、藥劑學(xué)研究：評(píng)估水溶性差的藥物的沉淀動(dòng)力學(xué)，監(jiān)測(cè)藥物從過(guò)飽和溶液中的沉淀隨時(shí)間的變化過(guò)程。
9、量化細(xì)胞水平的變化：超高的靈敏度，系統(tǒng)能夠深入了解細(xì)胞動(dòng)態(tài)生長(zhǎng)過(guò)程，因?yàn)閱渭?xì)胞水平的變化是量化的。
10、復(fù)雜樣品分析及微生物形態(tài)鑒別：通過(guò)內(nèi)置的劃分算法，能夠自動(dòng)執(zhí)行單細(xì)胞分析，并在復(fù)雜樣品中區(qū)分和表征不同細(xì)胞類型的動(dòng)力學(xué)。
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